利用血管紧张素i的提取比较传统spe柱与磁性萃取剂的性能
关键词
血管紧张素i,液相色谱质谱,固相萃取,angiotensin i,ang i,renin,lc-ms/ms,spe
前言
血管紧张素i(ang i)是较为常见的临检标志物之一,通过对血管紧张素i提取效果的测试,能够有效地评价各种样品前处理手段的临床适用性和技术性能。
本文通过对比市售的某进口品牌hlb 96位spe多孔板和hlb磁性spe萃取剂提取ang i试验的各项方法学指标,直观地比较了两者的性能表现。也为临床spe样品前处理技术的发展前景提供了非常有价值的参考。
实验设计
如上表所示,使用1% bsa制备四个浓度水平的ang i系列标准溶液,辅以稳定同位素标记的ang i内标。
设定如下条件的spe,应用于某进口品牌hlb 96位spe多孔板。使用适配的正压96孔spe操作装置运行样品。
步骤
名称
操作
1
活化
使用500 μl甲醇活化spe板两次
2
平衡
使用500 μl5%甲酸水溶液活化spe板两次
3
上样
取500 μl loq、低(l)、中(m)、高(h)上样
4
淋洗1
使用500 μl5%甲酸水溶液淋洗spe板两次
5
淋洗2
使用500 μl20%甲醇水溶液淋洗spe板两次
6
洗脱
每孔各加入250 μl甲醇,收集洗脱液于96孔板中
与此对应的,为auto m32全自动萃取仪设定如下的程序运行样品,每个样品使用2mg hlb磁性萃取剂。
指令
溶液
孔位
溶剂量(μl)
活化
甲醇
1
500
平衡
5%甲酸水溶液
2
500
上样
样品溶液
3
500
淋洗1
5%甲酸水溶液
4
500
淋洗2
20%甲醇水溶液
5
500
洗脱
甲醇
6
250
排废
/
2
600
某进口品牌hlb96位spe多孔板
auto m32全自动萃取仪
数据和比较
将实验设计中所述的四个标准样本,每个样品重复三次提取,比较两种前处理方法提取后,在lc-ms/ms上测得的相对标准偏差,结果如下图所示。其中,左侧蓝色柱为使用某进口品牌hlb 96位spe多孔板提取后的测定结果,右侧橙色柱为使用磁性萃取剂提取后的测定结果。
可以看到,两种前处理方法无论在外表峰面积、内标峰面积、计算浓度上的相对标准偏差均没有显著的差别,但是磁性萃取剂的结果在大多数水平下都略好于传统的96位spe多孔板。
在提取率的比较中,我们选择某进口品牌hlb 96位spe多孔板提取后测得的峰面积为基准(99%),以磁性萃取剂提取后测得的峰面积与之比较。如下图所示,左侧蓝色柱为使用某进口品牌hlb 96位spe多孔板提取后的测定结果,右侧橙色柱为使用磁性萃取剂提取后的测定结果。
可以看到,在所有浓度水平下,磁性萃取剂提取测得峰面积均显著地好于传统的96位spe多孔板,且均超过后者50%以上,甚至达到了约1.8倍。
最后如下图展示的loq水平两种方法提取后,在lc-ms/ms所得的mrm色谱图。图a为使用传统的96位spe多孔板所得色谱图,图b为磁性萃取剂所得色谱图。
明显地,在loq水平下,磁性萃取剂提取得到的色谱峰高超过了传统的96位spe多孔板提取,这与提取率结果是一致的。
结果讨论
通过上述数据比较,我们可以得到如下表所述的结果。
可以看到,在以上评价范围内,磁性萃取剂的提取效果均优于某进口品牌的hlb 96位spe多孔板。同时,auto m32全自动提取仪固有的“一次移液”和“无人值守”操作模式,降低了样品前处理中的人为参与,同时大幅提高了自动化水平。
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