胎牛血清中的病毒检查

胎牛血清是实验室常用的天然培养基。它富含各种营养,但也容易因母牛存在的病毒感染而携带有病毒,从而给细胞培养带来潜在的干扰。因此,不但要从源头上保证怀孕的母牛是健康的,没有各种传染病(包括没有疯牛病疫情),屠宰场需在政府注册过,而且在胎牛血清的质检中,也要进行各种病毒检查,以保证胎牛血清的品质。而胎牛血清的批号,则保证了每个批次的生产都是可以追溯的。
在美国,胎牛血清的病毒检查遵循着9 cfr 113.52 、9 cfr 113.53联邦法令,并以兽药委员会(cvmp)关于免疫性兽药生产中应用牛血清的指南文件(emea/cvmp/743/00-rev.2)、药委员会(cpmp)关于生物药生产中牛血清应用指南的文件(emea/cpmp/bwp/1793/02)为参考,并在美国药典(usp)中有所描述。而我国在药典中目前只有有关新生牛血清的质检规定,还没有胎牛血清的内容。
在usp提到病毒检查中,建议使用两种或两种以上的细胞系作为检测细胞,其中一种细胞系应为牛源。检测时,添加15%的待测牛血清培养细胞至少21天,期间细胞至少传代两次。之后观察是否存在病毒的扩增。
如用显微镜观察是否存在细胞病变效应(例如由牛鼻支气管炎病毒导致)、细胞染色和镜下包涵体检查、血吸附检查((牛副流感3型病毒),并在此基础上进行针对如下病毒的特异性的免疫荧光抗体检查:
ø牛病毒性腹泻病毒(bvdv)
ø牛细小病毒
ø牛腺病毒
ø牛兰舌病毒
ø牛呼吸道合胞病毒
ø呼肠弧病毒
ø狂犬病病毒
在其他牛血清的应用中,可能还需要检测一些其他的病毒。如:
牛赤羽病,牛疱疹病毒1(bhv-1)、副流感-3病毒(pi-3)、牛白血病、牛轮状病毒、牛圆环病毒、牛多瘤病毒、冠状病毒、牛环曲病毒、牛肠道病毒、牛星状病毒、口蹄疫病毒(fmdv)、牛瘟病毒。
总之,确定牛血清没有病毒感染,无论对于细胞培养,还是疫苗生产,都具有非常重要的意义。

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