比色法检测生物素/蛋白质摩尔质量比
1.吸取900 ul haba/亲和素溶液于1ml比色杯。
2.测定该溶液在500 nm 处的吸收值并记录为“a500 haba/avidin”。
3.吸取100 ul 生物素标记的蛋白于杯中并测定500 nm 的吸光度值，记为a500 haba/avidin/biotin （数值必须恒定15s 以上）如果a500 haba/avidin/biotin的值不超过（≤）0.3，重新稀释待测样品并检测。
注：计算结果时必须考虑稀释度。
计算biotin/protein摩尔比：
①a=生物素化的蛋白毫摩尔浓度＝蛋白浓度（mg/ml）/蛋白的分子量
②b=500nm处的吸光度变化
△a500=（0.9×a500haba/avidin）-a500haba/avidin/biotin
③c=生物素的毫摩尔浓度=mmol biotin/ml反应溶液=△a500/（34,000×光程）
④biotin/protein摩尔比=c•10•稀释倍数/
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注：计算结果时必须考虑稀释度。
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①a=生物素化的蛋白毫摩尔浓度＝蛋白浓度（mg/ml）/蛋白的分子量
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