固相萃取仪的操作方法
固相萃取仪是液固萃取柱和液相色谱技术结合发展而来的样品预处理技术，可用于样品的分离、纯化和浓缩，广泛应用于医药、食品、环保等领域。
1.选择小柱或滤膜
小柱或滤膜的大小与规格应视样品中待测物的浓度大小而定。对于浓度较低的体内样品, 一般应选用尽量少的固定相填料萃取较大体积的样品。
2.活化
萃取前先用充满小柱的溶剂冲洗小柱或用5-10ml 溶剂冲洗滤膜使填料保持湿润, 因为填料干燥会降低样品保留值，而各小柱的干燥程度不一,也会影响回收率的重现性。
3.上样
一般可采取以下四种方法：
(1) 用0.1mol/l 酸或碱调节, 使ph<3或ph>9, 离心取上层液萃取；
(2)用甲醇、乙腈等沉淀蛋白质后取上清液, 以水或缓冲液稀释后萃取；
(3)用酸或无机盐沉淀蛋白质后取上清液, 调节ph 值后萃取；
(4)超声15min后加入水、缓冲液, 取上清液萃取。流速应控制为1ml/min, 流速快不利于待测物与固定相结合。
4.淋洗
反相spe的清洗溶剂多为水或缓冲液, 可在清洗液中加入少量有机溶剂、无机盐或调节ph值。加入小柱的清洗液应不超过一个小柱的容积, 而spe滤膜为5～10ml。
5.洗脱
应选用5～10ml离子强度较弱但能洗下待测物的洗脱溶剂。若需较高灵敏度, 则可先将洗脱液挥干后, 再用流动相重组残留物后进样。体内样品洗脱后多含有水, 可选用冷冻干燥法。保留能力较弱的spe 填料可用小体积、较弱的洗脱液洗下待测物,再用极性较强的hplc 分析柱分析洗脱物。
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3.上样
一般可采取以下四种方法：
(1) 用0.1mol/l 酸或碱调节, 使ph<3或ph>9, 离心取上层液萃取；
(2)用甲醇、乙腈等沉淀蛋白质后取上清液, 以水或缓冲液稀释后萃取；
(3)用酸或无机盐沉淀蛋白质后取上清液, 调节ph 值后萃取；
(4)超声15min后加入水、缓冲液, 取上清液萃取。流速应控制为1ml/min, 流速快不利于待测物与固定相结合。
4.淋洗
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5.洗脱
应选用5～10ml离子强度较弱但能洗下待测物的洗脱溶剂。若需较高灵敏度, 则可先将洗脱液挥干后, 再用流动相重组残留物后进样。体内样品洗脱后多含有水, 可选用冷冻干燥法。保留能力较弱的spe 填料可用小体积、较弱的洗脱液洗下待测物,再用极性较强的hplc 分析柱分析洗脱物。
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