缓冲液常见的配置方法您都了解吗？
缓冲液是一种能在加入少量酸或碱和水时大大减低ph变动的溶液.ph缓冲系统对维持生物的正常ph值和正常生理环境起到重要作用.多数细胞仅能在很窄的ph范围内进行活动,而且需要有缓冲体系来抵抗在代谢过程中出现的ph变化.在生物体中有三种主要的ph缓冲体系,它们是蛋白质缓冲系统、重碳酸盐缓冲系统以及磷酸盐缓冲系统.每种缓冲体系所占的分量在各类细胞和器官中是不同的。
缓冲液根据用途，一种是单纯的hepes+naoh，另一种是hepes+盐。各种配制方法总结如下：
一、500ml 1 m hepes, ph = 7.0 stock solution的配制
119.15 g hepes 溶解在400ml蒸馏水中，加0.5~1m 的naoh水溶液调节至少所需ph(hepes的有效ph 范围是6.8~8.2)，然后用蒸馏水定容至500ml，于4摄氏度保存。
二、加少量盐的hepes buffer配方(500ml)
hepes 6.5g、nacl 8.0g、na2hpo4.7h2o 0.198g、用0.5m naoh 水溶液调节ph值，较后定容。
三、2×hepes缓冲盐溶液的配制
将1.6g nacl、0.074g kcl、0.027g na2hpo4.2h2o、0.2g葡聚糖(glucan or dextran)和1g hepes溶解在90ml的蒸馏水，用0.5m naoh调节至所需ph值，再用蒸馏水定容至100ml即可。
hepes使用方法有两种：
(1)hepes可按所需的浓度直接加入到配制的培养液中，再过滤除菌。每1000ml培养液中加入2.38克hepes，待溶后用ln naoh 调ph至7.2，滤过除菌后使用。此时hepes的使用浓度为10 mmol/l。
(2)亦可配成 100 x 贮存液(l mol/l)，使用前取 99ml培养液加入 lml贮存液，较终应用浓度仍为10mmol/l。l mol/l(100 x)hepes贮存液配制方法：取23.8g hepes溶于90ml双蒸水中，用ln naoh调ph至7.5一8.0，然后用水定容至100ml，过滤除菌，分装小瓶(2ml/瓶)，4℃或-20℃保存。
需要注意的是，hepes缓冲液的使用终浓度为10-50mmol/l，对细胞无毒性作用。一般情况下，浓度为20mmol/l的hepes即可达到缓冲能力。
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二、加少量盐的hepes buffer配方(500ml)
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三、2×hepes缓冲盐溶液的配制
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(1)hepes可按所需的浓度直接加入到配制的培养液中，再过滤除菌。每1000ml培养液中加入2.38克hepes，待溶后用ln naoh 调ph至7.2，滤过除菌后使用。此时hepes的使用浓度为10 mmol/l。
(2)亦可配成 100 x 贮存液(l mol/l)，使用前取 99ml培养液加入 lml贮存液，较终应用浓度仍为10mmol/l。l mol/l(100 x)hepes贮存液配制方法：取23.8g hepes溶于90ml双蒸水中，用ln naoh调ph至7.5一8.0，然后用水定容至100ml，过滤除菌，分装小瓶(2ml/瓶)，4℃或-20℃保存。
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