鸿朗科技带您了解*、D、E的测定
维生素a（retinol）、维生素d（vitamin d2 和vitamin d3）、*（tocopherol）是机体维持正常代谢和机能的所必需的*。其中维生素e 有8 种异构体形式，即4 种生育酚（α、β、γ、δ-tocopherols）和4 种三烯生育酚（α、β、γ、δ-tocotrienols），均具有重要的生物活性，被认为是一类主要的抗氧化剂。通常α-生育酚被报道是活性高的一种* 形式，因此很多文献报道的分析方法仅测定了α-生育酚的含量。近研究表明，其他几种异构体形式也在人体中具有重要的作用，并且γ-生育酚具有抗癌作用。* 异构体结构的复杂性和活性的差异，决定了建立一种准确可靠的分析方法，来分离和测定食品基质中各个异构体含量，具有重要意义。如何进行食品中*、d、e的测定呢？
新版国标gb5009.82-2016对*的四种异构体的分析提出了要求。而常规c18色谱柱很难将其实现基线分离。另外维生素d 也是婴幼儿配方食品中一种重要的营养素，在用常规反相c18分析d2 和d3异构体的时候经常遇到分离度差的问题。
本文建立了同时测定食品中d和e含量的液相色谱法，可实现对*的四种异构体和d2和d3两种异构体的分析及准确定量。
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样品前处理
取维生素 d2、d3 和e 标准品适量，精密称定，至25 ml 量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，制成浓度分别为 1.0 mg/ml 维生素 d3 和 d2 溶液和 2.06 mg/ml 维生素 e 储备溶液。
分别精密量取维生素 d3 和 e 的标准品溶液适量，至 10 ml 棕色量瓶中，配制成混合溶液，再分别精密加入等量的浓度为 10 μg/ml 的维生素 d2 的内标溶液，甲醇稀释至刻度，分别得到浓度为：ɑ-ve：2.4μg/ml，ß-ve：2μg/ml,γ-ve:1.6μg/ml、δ-ve:2.4μg/ml, d3: 0.08μg/ml.
仪器方法
四种*异构体分析的色谱条件：
方法一
色谱柱：acclaim c30
4.6×250 mm,5 μm(货号：075718)
流动相：甲醇-水
流速：0.8ml/min
检测器：紫外，296nm
柱温：20℃
进样量：10μl
仪器：ultimate 3000
图1 四种*的实验图谱:acclaim c30
方法二
色谱柱：accucore pfp
3.0×150 mm,2.6 μm(货号：17426-153030)
或 gold pfp4.6×250 mm,5 μm(货号：25405-254630)
流动相：甲醇-水
流速：0.6ml/min （accucore pfp）,1ml/min（gold pfp）
检测器：紫外，296nm
柱温：20℃
进样量：10μl
仪器：ultimate 3000
图2 四种*的实验图谱：accucore pfp
图3 四种*的实验谱图：gold pfp
两种*异构体分析的色谱条件：
色谱柱：hypersil green pah
4.6×150 mm,3 μm(货号：31103-154630)
流动相：乙腈：甲醇=60:40
流速：1ml/min
检测器：紫外，264nm
柱温：35℃
进样量：10μl
仪器：ultimate 3000
图4 两种*异构体的实验图谱
结论
采用赛默飞公司acclaim c30，accucore pfp，gold pfp及hypersil green pah 色谱柱可按照国标gb 5009.82-2016条件对*de进行分析，并对各化合物有较好的保留和分离。
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本文建立了同时测定食品中d和e含量的液相色谱法，可实现对*的四种异构体和d2和d3两种异构体的分析及准确定量。
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取维生素 d2、d3 和e 标准品适量，精密称定，至25 ml 量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，制成浓度分别为 1.0 mg/ml 维生素 d3 和 d2 溶液和 2.06 mg/ml 维生素 e 储备溶液。
分别精密量取维生素 d3 和 e 的标准品溶液适量，至 10 ml 棕色量瓶中，配制成混合溶液，再分别精密加入等量的浓度为 10 μg/ml 的维生素 d2 的内标溶液，甲醇稀释至刻度，分别得到浓度为：ɑ-ve：2.4μg/ml，ß-ve：2μg/ml,γ-ve:1.6μg/ml、δ-ve:2.4μg/ml, d3: 0.08μg/ml.
仪器方法
四种*异构体分析的色谱条件：
方法一
色谱柱：acclaim c30
4.6×250 mm,5 μm(货号：075718)
流动相：甲醇-水
流速：0.8ml/min
检测器：紫外，296nm
柱温：20℃
进样量：10μl
仪器：ultimate 3000
图1 四种*的实验图谱:acclaim c30
方法二
色谱柱：accucore pfp
3.0×150 mm,2.6 μm(货号：17426-153030)
或 gold pfp4.6×250 mm,5 μm(货号：25405-254630)
流动相：甲醇-水
流速：0.6ml/min （accucore pfp）,1ml/min（gold pfp）
检测器：紫外，296nm
柱温：20℃
进样量：10μl
仪器：ultimate 3000
图2 四种*的实验图谱：accucore pfp
图3 四种*的实验谱图：gold pfp
两种*异构体分析的色谱条件：
色谱柱：hypersil green pah
4.6×150 mm,3 μm(货号：31103-154630)
流动相：乙腈：甲醇=60:40
流速：1ml/min
检测器：紫外，264nm
柱温：35℃
进样量：10μl
仪器：ultimate 3000
图4 两种*异构体的实验图谱
结论
采用赛默飞公司acclaim c30，accucore pfp，gold pfp及hypersil green pah 色谱柱可按照国标gb 5009.82-2016条件对*de进行分析，并对各化合物有较好的保留和分离。
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