小鼠Th1/Th2和Tc1/Tc2的检测
1．检测原理
小鼠 th1/th2 细胞及 tc1/tc2 细胞与人的相似，均可分泌多种细胞因子：
th1 细胞主要分泌 il-2、il-12、ifn-γ和 tnf-β等；
th2 细胞主要分泌 il-4、il-5、il-6 和 il-10
与人相同，鉴别 th1/th2 及 tc1/tc2 同样采用下面的组合：
th1：cd4+ifn-γ+,
th2：cd4+il-4+
tc1：cd8+ifn-γ+,
tc2：cd8+il-4+
刺激素也是我们通常选用的为 pma(佛波酯)+ ionomycin(离子霉素)。
与人 th1/th2 和 tc1/tc2 不同的是，小鼠淋巴细胞在 pma 和 ionomycin 的刺激下，其表面的 cd4 抗原下降不明显，因此可以用 cd4 和 cd8 的抗体直接设门分析 th1/th2 及 tc1/tc2。但如果同时想得到th1/th2 及 tc1/tc2 的数据，也可采用 cd3 和 cd8 反设门法，即 cd3+cd8+代表 tc，cd3+cd8-代表 th，在此基础上得到 ifn-γ和 il-4 表达的百分率。
2. 检测方法
【试剂】
pma、 ionomycin、bfa(brefeldin a)、monensin 和 rpmi1640 的配制与人 th1/th2 和 tc1/tc2 检测相同，详见第三部分的检测方法。
【抗体和破膜剂】
► 抗体
供应商 产品名称 货号 亚型
multisciences anti-mouse cd3e (145-2c11), percp-cy5.5 70-am003e07-250 armenian hamster igg
multisciences anti-mouse cd8a (53-6.7), fitc 70-am008a01-250 rat igg2a, κ
multisciences anti-mouse ifn-γ (xmg1.2), pe 70-am0if04-250 rat igg1, κ
multisciences anti-mouse il-4 (11b11), pe 70-am0i404-250 rat igg1, κ
► 同型对照
供应商 产品名称 货号 对应抗体
multisciences rat igg1 isotype control (hppn), pe 70-crg104-50 ifn-γ、il-4
► 破膜剂
供应商 产品名称 货号 规格
multisciences fix&perm kit 70-gas006 200t
【抗体组合】► 三色法
管号 fitc pe pe-cy5 注释
1 cd8 rat igg1 cd3 第 2，3 管的同型对照
2 cd8 ifn-γ cd3 cd3+cd8- ifn-γ+为 th1 细胞
cd3+cd8+ ifn-γ+为 tc1 细胞
3 cd8 il-4 cd3 cd3+cd8- il-4+为 th2 细胞
cd3+cd8+ il-4+为 tc2 细胞
【实验步骤】
► 1．标本采集及制备
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th2：cd4+il-4+
tc1：cd8+ifn-γ+,
tc2：cd8+il-4+
刺激素也是我们通常选用的为 pma(佛波酯)+ ionomycin(离子霉素)。
与人 th1/th2 和 tc1/tc2 不同的是，小鼠淋巴细胞在 pma 和 ionomycin 的刺激下，其表面的 cd4 抗原下降不明显，因此可以用 cd4 和 cd8 的抗体直接设门分析 th1/th2 及 tc1/tc2。但如果同时想得到th1/th2 及 tc1/tc2 的数据，也可采用 cd3 和 cd8 反设门法，即 cd3+cd8+代表 tc，cd3+cd8-代表 th，在此基础上得到 ifn-γ和 il-4 表达的百分率。
2. 检测方法
【试剂】
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3 cd8 il-4 cd3 cd3+cd8- il-4+为 th2 细胞
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