鸡ELISA试剂盒实验血清的步骤

鸡elisa试剂盒实验稀释血清的步骤:
先把蛋白稀释一定的倍数,比如说10倍、20倍稀释(这样可以大体确定一个参数),将抗原进行一系列稀释包被微量反应板,再用一定稀释度的阳性参考血清和阴性参考血清进行孵育后洗涤,再加酶结合物进行反应,经孵育洗涤后,加底物溶液显色,终止反应后分别测定o.d值,选择o.d值≥1.0的那个抗原稀释度为zui适包被浓度。
一般总是要选择那个o.d值稍大于1.0,而不选择小于1.0的抗原浓度。阴性参考血清o.d值要求<0.1-0.2。也就是要求阳性参考血清和阴性参考血清的o.d值有明显差别。
在鸡elisa试剂盒实验血清为什么要稀释?有两个原因:
(1)竞争抑制比较明显,应稀释竞争物;
(2)以降低非特异性反应,使特异性的抗原抗体反应充分体现出来。血清稀释用普通的pbs即可,可加1%的bsa,能有效降低鸡elisa试剂盒本底,当然如果你嫌麻烦我觉得用生理盐水替代pbs关系也不大。不管你是用直接竞争还是间接竞争,血清的稀释倍数肯定要事先确定,但也不用yi点点,你做一个预试验即可,选择od在1.0左右的稀释倍数,即你的竞争鸡elisa试剂盒中阴性孔od在1.0,这样作出来的曲线比较敏感。

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