蛋白质浓度测定方法
蛋白质是细胞中最重要的含氮生物大分子之一，承担着各种生物功能。蛋白质的定量分析是蛋白质构造分析的基础。目前常用的蛋白测量的方法主要有bca法、考马斯亮蓝法(bradford)和lowry法等。
bca法
原理
在碱性环境下蛋白质与cu2+络合并将cu2+还原成cu1+(biuret reaction)。bca与cu1+结合形成稳定的紫蓝色复合物，在562nm处有高的光吸收值并与蛋白质浓度成正比，据此可测定蛋白质浓度。
实验步骤
1.按试剂盒说明书配置bca工作液；
2.完溶解蛋白质标准品，加到96孔板的蛋白标准品孔中，按照说明书要求对标品进行梯度稀释，加入bca工作液，用酶标仪测定其吸光度；
3.以样品浓度为x轴，吸光度为y轴，绘制标准曲线；
4.待测样品中加入bca工作液，测定吸光度，带入标准曲线中，计算样品浓度。
与lowery法相比，bca蛋白测定方法灵敏度高，操作简单，试剂及其形成的颜色复合物稳定性俱佳，并且受干扰物质影响小。与bradford法相比，bca法的显著优点是不受去垢剂的影响。
考马斯亮蓝法(bradford)法
原理
考马斯亮蓝g-250(coomassie brilliant blue g-250)测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm;当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。
实验步骤
1.按试剂盒说明书配置bradford染液；
2.溶解蛋白质标准品，加到96孔板的蛋白标准品孔中，按照说明书要求对标品进行梯度稀释，加入染液和染料结合液后，用酶标仪测定其吸光度；
3.以标品浓度为x轴，吸光度为y轴，绘制标准曲线；
4.各孔中加入染液和染料结合液，测定样品吸光度，带入标准曲线中，计算样品浓度。
bradford法试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg/ml，最小可测2.5μg/ml蛋白质。
斐林—酚试剂(lowry)法
原理
斐林(folin)-酚试剂法结合了双缩脲试剂和酚试剂与蛋白质的反应，其中包括两步反应：第一步是在碱性条件下，与铜试剂作用生成蛋白质-铜络合物;第二步是此络合物将磷钼酸、磷钨酸试剂还原，生成磷钼蓝和磷钨蓝的深蓝色混合物，颜色深浅与蛋白含量成正相关，在650nm波长下有最大光吸收。
实验步骤
与上述两种方法大致相同
lorry法灵敏度高,重复性好，适于5～l00μg蛋白质的定量，耗时长，操作要严格计时，在实验中要特别注意排除还原物质、柠檬酸等的干扰作用才能得到最准确的实验结果。
这几种方法共同点在于，都需要绘制标准曲线，而标准曲线及待测样品往往数量较多，为了缩短实验耗时，保证测量准确性，可使用酶标仪对吸光度进行测定。
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bca法
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在碱性环境下蛋白质与cu2+络合并将cu2+还原成cu1+(biuret reaction)。bca与cu1+结合形成稳定的紫蓝色复合物，在562nm处有高的光吸收值并与蛋白质浓度成正比，据此可测定蛋白质浓度。
实验步骤
1.按试剂盒说明书配置bca工作液；
2.完溶解蛋白质标准品，加到96孔板的蛋白标准品孔中，按照说明书要求对标品进行梯度稀释，加入bca工作液，用酶标仪测定其吸光度；
3.以样品浓度为x轴，吸光度为y轴，绘制标准曲线；
4.待测样品中加入bca工作液，测定吸光度，带入标准曲线中，计算样品浓度。
与lowery法相比，bca蛋白测定方法灵敏度高，操作简单，试剂及其形成的颜色复合物稳定性俱佳，并且受干扰物质影响小。与bradford法相比，bca法的显著优点是不受去垢剂的影响。
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原理
考马斯亮蓝g-250(coomassie brilliant blue g-250)测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm;当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。
实验步骤
1.按试剂盒说明书配置bradford染液；
2.溶解蛋白质标准品，加到96孔板的蛋白标准品孔中，按照说明书要求对标品进行梯度稀释，加入染液和染料结合液后，用酶标仪测定其吸光度；
3.以标品浓度为x轴，吸光度为y轴，绘制标准曲线；
4.各孔中加入染液和染料结合液，测定样品吸光度，带入标准曲线中，计算样品浓度。
bradford法试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg/ml，最小可测2.5μg/ml蛋白质。
斐林—酚试剂(lowry)法
原理
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实验步骤
与上述两种方法大致相同
lorry法灵敏度高,重复性好，适于5～l00μg蛋白质的定量，耗时长，操作要严格计时，在实验中要特别注意排除还原物质、柠檬酸等的干扰作用才能得到最准确的实验结果。
这几种方法共同点在于，都需要绘制标准曲线，而标准曲线及待测样品往往数量较多，为了缩短实验耗时，保证测量准确性，可使用酶标仪对吸光度进行测定。
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