荧光定量PCR（qPCR）使用方法
荧光定量pcr法（qpcr）：是在常规pcr基础上，将『针对支原体特异性保守序列的探针』做荧光标记，使pcr扩增后的产物带有荧光，利用荧光信号的变化和配套软件，进行dna扩增反应的实时监测，简称qpcr。
（经典法）
1) 符合欧洲药典、中国药典要求，更适合细胞治疗，car-t，抗体药、疫苗等临床项目申报和质检。
2）样本需先做dna抽提。抽提后样本加入量为10μl。
3) 厂家可协助完善方法验证步骤。
支原体荧光定量pcr(qpcr)检测试剂盒（一步法）
1）适合科研单位检测，或单位内检，用荧光定量pcr(qpcr)法检测细胞或其他生物基质。
2) 比药典操作标准合并了一步，（将内控对照试剂预先混合在pcr mix试剂中），操作更简洁。
3)样本量为2μl，灵敏度为50个基因组拷贝/反应。结果准确。
优点：
①灵敏度高、特异性强。
②时间短，2-3小时出结果。
③检测结果可定量。
④操作简便。
缺点：
①对于已做支原体灭活处理的样品，由于支原体dna仍旧存在其中，pcr结果会出现假阳性。（可用培养法做补充验证）
②不同厂家生产的试剂盒质量差异巨大（由于引物及内在设计不同），需谨慎选择，尽量在专业人员推荐指导下使用。
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3) 厂家可协助完善方法验证步骤。
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缺点：
①对于已做支原体灭活处理的样品，由于支原体dna仍旧存在其中，pcr结果会出现假阳性。（可用培养法做补充验证）
②不同厂家生产的试剂盒质量差异巨大（由于引物及内在设计不同），需谨慎选择，尽量在专业人员推荐指导下使用。
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