abts自由基清除能力检测试剂盒(微量法)
产品货号:ba1868
产品规格:100管/48样
产品简介:
abts法可用于亲水性和亲脂性物质抗氧化能力测定,是使用泛的间接检测方法。abts经氧化后生成稳定的蓝绿色阳离子abts自由基,在405nm或734nm处有最大吸收峰。被测物质加入abts自由基溶液后,所含抗氧化成分能与abts自由基发生反应而使反应体系褪色,405nm的吸光度下降,在一定范围内其吸光度的变化与自由基被清除的程度成正比。本试剂盒中,通过测定吸光度下降的程度来反映样本清除abts自由基的能力。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
产品组成:
试剂名称
规格
保存条件
提取液
液体80ml×1瓶
2-8℃
试剂一
液体40ml×1瓶
2-8℃
试剂二
粉剂×1瓶
2-8℃
试剂三
液体20µl×1支
2-8℃
试剂四
液体1.5ml×1支
-20℃
试剂五
粉剂×1支
2-8℃
溶液的配制:
1.试剂二:临用前加入1ml蒸馏水,充分溶解;用不完的试剂可分装后保存,-20℃可保存四周,避免反复冻融;
2.试剂三工作液的配制:液体置于试剂瓶内ep管中。临用前根据样本量按试剂三(µl):蒸馏水(ml)=1µl:12ml 的比例配成试剂三工作液,现用现配,用多少配多少,尽量在4h之内用完;
3.试剂四工作液的配制:可先将试剂四-20℃分装保存。临用前根据样本量按试剂四:试剂一(v:v)=1:9的比例配成试剂四工作液,现配现用,现配现用,用不完的试剂放于-20℃可保存两周。
4.试剂五:粉剂置于试剂瓶内玻璃瓶中,含有5mg维生素c。临用前加入2.8ml提取液,充分振荡溶解; 配成10mmol/l维生素c溶液,用于阳性对照。2-8℃可保存两周。
5.abts工作液的配制:临用前根据样本量按试剂一:试剂二:试剂三工作液(v:v:v)=76:5:4的比例配成abts工作液,现用现配,室温避光保存,务必在30分钟内使用。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、恒温水浴锅、台式离心机、研钵/粉碎机、烘干箱、30~50 目筛、冰、蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可参考文献)
1.植物组织样本的制备:将新鲜样本置于60℃烘箱烘干至恒重,研钵研碎(或粉碎机粉碎),过30~50目筛;称取约0.05g样本,加入1ml提取液后置于40℃水浴锅中浸提30min;10000rpm室温离心10min,取上清,置于冰上待测。
2.红酒、果汁等液体样本:吸取100µl样本溶液加入900µl提取液,旋涡振荡混匀,室温10000rpm离心10min,取上清,置冰上待测。
3.提取物或者药物:可用提取液配制成一定浓度,如5mg/ml。
注意:不同样本清除abts自由基的能力可能相差很大,为保证实验结果的准确性,样本要根据预实验结果进行适当调整(如清除率大于90%,建议将提取的样本用提取液进行稀释;清除率小于5%,建议加大烘干样本质量或液体样本体积进行提取)。
二、测定步骤
1.分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至405nm,分光光度计用蒸馏水调零。
2.阳性对照的准备:若需要线性关系,建议将10mmol/l的维生素c溶液用提取液配制成1、0.8、0.6、0.4、 0.2、0.1mmol/l的维生素c溶液待用,稀释可参考下表;若需要清除率约为90%的阳性对照,则建议将10mmol/l维生素c溶液用提取液配制成大于1mmol/l的维生素c溶液待用。
序号
稀释前浓度(mmol/l)
维生素 c 溶液体积(µl)
提取液体积(µl)
稀释后浓度(mmol/l)
1
10
100
900
1
2
1
160
40
0.8
3
1
120
80
0.6
4
1
80
120
0.4
5
1
40
160
0.2
6
1
20
180
0.1
备注:实验中每个标准管需10µl维生素c溶液。
3.操作表:在96孔板或ep管中分别加入下列试剂:
试剂名称(μl)
空白管
测定管
对照管
阳性对照管
上清液
-
10
10
-
不同浓度的vc溶液
-
-
-
10
蒸馏水
10
-
-
-
试剂四工作液
20
20
-
20
abts工作液
170
170
-
170
试剂一
-
-
190
-
充分混匀,室温避光静置6min。测定405nm处的吸光度。分别记为a空白、a测定、a对照、a阳性对照,阳性对照标准曲线和空白管只需测1-2次。
三、abts自由基清除率的计算
1.阳性对照的自由基清除率计算公式:
abts自由基清除率dvc% =[(a空白-a阳性对照)÷a空白]×100%。
2.样本的自由基清除率计算公式:
abts自由基清除率d% =[a空白-(a测定-a对照)]÷a空白×100%。
注意事项:
1.不同样本清除abts自由基的能力可能相差很大,如果要比较不同样本的abts自由基清除能力,建议对于同一批样本加入等量的样本,红酒、组织匀浆、果汁等液体样本加入同样体积,提取物(或者药物)配制成同样浓度。在比较时,将样本根据预实验结果进行适当调整,比较同样浓度(相同稀释倍数)的清除率大小。
2.样本建议当天提取当天检测。
实验实例:
1.取0.05g辣椒加入1ml提取液进行匀浆研磨,离心取上清后按照测定步骤操作,计算清除率得:
d%=[a空白-(a测定-a对照)]÷a空白×100% =[1.111-(0.365-0.061)]÷1.111×100%=72.637%。
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