引言:中国*使用中药和中药制剂,对其治疗作用有丰富的经验。但质量控制仅局限在外观检查是不够的。随着新技术的发展,已经发现某些中药中有几百种化合物,其浓度范围很宽。而且,产地不同和采摘时期不同,以及炮制和加工工艺不同,中草药的成分也不同。因此,对中药化合物的质量控制挑战性。现在,只测定中药制剂中一个或两个成分进行质量控制已经不够了,因为特殊配方的中药制剂都是由一种以上中药组成的。例如,*,一种用于治疗冠心病的中成药,包含4种中药:黄芪、丹参、三七、降香
本研究以*为样品,用高分离度快速液相色谱(rrlc)-紫外-可见检测器和质谱联用,建立中药质量控制的新方法。主要目标是建立一种可靠的方法,能够选测定在加热和混合过程中不变的潜在目标化合物。
实验仪器
agilent1200系列rrlc系统包括:带真空脱气机的sl型二元泵、sl型高性能自动进样器、配置微量流通池(2 μl体积,3 mm光程)的sl型柱温箱和二极管阵列检测器sl,
agilent 6410四极杆质谱仪,配置esi离子源
agilent化学工作站b.02.01 sr1,用于数据采集和分析
agilent zorbax xdb c18 rrht色谱柱,3.0 x 50 mm, 1.8 μm粒径
标准品
丹酚酸b、丹参酮i、丹参酮iia、隐丹参酮、丹参素、三七皂甙r1和黄芪甲苷均购自中国药品生物制品检定所(nicpbp),人参皂甙rg1、人参皂甙rb1、原儿茶醛、原儿茶酸、人参皂甙re和人参皂甙rc购自sigma-aldrich公司(美国)。
溶剂
乙腈购自fisher公司(美国),水由milli-q纯水系统制备。
样品和样品制备
*、黄芪、丹参、三七的中间提取物,及降香精油,由中国tasly制药公司提供。原药材购自当地中药店。
滴丸、中药提取物和中药原料溶于70 %甲醇/水溶液中,超声提取30分钟,用0.22 μm滤膜过滤。
rrlc方法
流动相:
a: 0.1 %甲酸水
b:乙腈,含0.1 %甲酸
梯度:0分钟,10 %b;8分钟,38 %b;12分钟,100 %b;持续3分钟,然后10 %b
流速:1.0 ml/min(被动分流器将进入m s的流速降至0.4 ml/min)
柱温:45 °c
检测波长:203 nm
峰宽:0.5 s
狭缝宽度:4 nm
光谱:190-400 nm,2 nm步进
标准品
丹酚酸b、丹参酮i、丹参酮iia、隐丹参酮、丹参素、三七皂甙r1和黄芪甲苷均购自中国药品生物制品检定所(nicpbp),人参皂甙rg1、人参皂甙rb1、原儿茶醛、原儿茶酸、人参皂甙re和人参皂甙rc购自sigma-aldrich公司(美国)。
溶剂
乙腈购自fisher公司(美国),水由milli-q纯水系统制备。
样品和样品制备
*、黄芪、丹参、三七的中间提取物,及降香精油,由中国tasly制药公司提供。原药材购自当地中药店。
滴丸、中药提取物和中药原料溶于70 %甲醇/水溶液中,超声提取30分钟,用0.22 μm滤膜过滤。
rrlc方法
流动相:
a: 0.1 %甲酸水
b:乙腈,含0.1 %甲酸
梯度:0分钟,10 %b;8分钟,38 %b;12分钟,100 %b;持续3分钟,然后10 %b
流速:1.0 ml/min(被动分流器将进入m s的流速降至0.4 ml/min)
柱温:45 °c
检测波长:203 nm
峰宽:0.5 s
狭缝宽度:4 nm
光谱:190-400 nm,2 nm步进
质谱方法
扫描:80-1400(正/负)
碰撞诱导解离电压:70(正/负)
干燥气体:12 l/min
雾化器压力:50 psi
干燥气温度:50 °c
毛细管电压:3200 v(正/负)
结果与讨论
用安捷伦方法转换计算器(光盘发行号5989-5130en)将常规液相色谱方法转换成高分离度快速液相色谱方法。
丹参三七黄芪和降香提取物的比较
由图1可见,在203 nm检测波长下,丹参和三七的色谱图与混合提取物有很大区别。混合和加热后,某些峰消失了,同时出现了一些新的色谱峰。
目标化合物筛选是质量控制的重要步骤,可以确定加工过程中这些化合物是否发生了变化。大多数研究者都用203 nm进行检测,因为主要活性化合物是皂甙,在203 nm波长下有弱吸收。但203 nm处的大峰可能与质量控制无关,那些小峰可能对研究活性成分更重要。因此,需要另一种灵敏度更高的检测器,提供这些成分的更多信息。
不同检测器和条件之间的比较
图2显示了紫外和ms检测的不同结果。在ms的总离子色谱图中有更多的峰,因为某些成分紫外吸收很弱或者没有吸收。用ms检测增加了另一维数据,并得到了这些不同化合物的结构信息。负离子模式给出了这些峰更完整的信息,可以对质量控制的目标化合物进行鉴定。
*和不同提取物之间的比较
图3显示了丹参、黄芪和降香提取物与*(由这三种提取物和其它填加剂制成)的色谱图。标记数字的峰就是对这一中药制剂质量控制筛选到的目标化合物。根据uv和ms数据,研究不同的色谱峰,以确定这些化合物是否发生了改变。表1列出了鉴别的结果。
结论
本应用报告报导的rrlc-紫外和ms检测方法比目前药典控制单一组分的质量控制方法更可靠,因为能够根据uv和ms检测器提供的信息跟踪中药中几种成分的质量。跟踪这些成分非常重要,因为这些成分可能在炮制和加工过程中发生变化。质谱测定使用的agilent 6140四极杆质谱仪,与agilent 1200系列rrlc系统和agilent化学工作站软件能够*集成。
供暖聚氨酯直面泡沫保温钢管价格
食品添加剂使用标准问答
齿轮油泵相关国家标准
西门子扩展模块 RS485 7KM9300-0AM00-0AA0
带反馈信号球阀Q41F带限位开关反馈信号回讯器手动球阀的参数
用高分离度快速液相色谱-UV和MS检测 建立可靠的中药制剂质控方法
话筒麦克风消毒机在KTV等娱乐场所的应用
滚动轴承运行规律与滚动轴承出现故障的原因
德国斯派克便携式光谱仪SPECTROTEST
农作物长势好不好,土壤养分检测仪为您来把关
家用*净水器的安装步骤和使用注意事项
研华工控机使用有哪些注意事项?
混凝土制品裂缝防治措施
干式螺杆真空泵的例行检查包括哪些
水泵振动大与调电流过大的解决方法
碳硫分析仪的测定方法
兽药检测仪助力肉制品食品安全
如何在工作中利用"技巧"提高雷蒙磨产量?
互感器伏安变比极性综合测试仪的产品特点
30kg生物质颗粒半自动定量包装秤参数