Taq DNA连接酶应用范围
taq dna连接酶应用范围
taq dna 连接酶是一种热稳定性连接酶，能够催化磷酸二酯键的形成，使与同一互补靶 dna 链杂交的两条相邻寡核苷酸链的 5´-磷酸末端和 3´-羟基末端通过磷酸二酯键相连。taq dna 连接酶催化的连接反应只有当两条寡核苷酸链与互补靶 dna 完全配对，并且两条寡核苷酸链之间没有空隙的条件下才可发生。因此，可以用它来检测单碱基替换。在 45℃-65℃ 范围内，taq dna 连接酶均有活性。
应用
双链dna切刻的修复
用于gibson组装方法的建立
活性定义
1 单位指 50μl 反应体系中，45℃ 条件下，15 分钟内能使 50% 的1μg 经 bsteii 消化的 λdna 片段（12 bp 粘性末端）发生连接所需要的酶量。
储存
-20℃可保存半年，长期储存请置于 -70℃。
1× taq dna 连接酶反应缓冲液
20 mm tris-hcl（ph 7.6），25 mm kac，10 mm mg(ac)2，10 mm dtt，1 mm nad 和 0.1% triton x-100，45℃ 温育。 该酶需 nad+ 作辅因子，在 10× taq dna 连接酶缓冲液中已添加 nad+；为了延长 nad+ 的半衰期，缓冲液应于 -70℃ 贮存。
合成酶，能催化两个分子连接成一个分子或把一个分子的尾相连接的酶。此反应与atp的分解反应相偶联。在把两分子相连接的同时发生三磷酸腺苷（atp)的高能磷酸键的断裂如dna连接酶等。
连接酶是酶分类中重要的一类(ec 6):6.1形成c-o键；6.2形成c-s键；6.3形成c-n键；6.4 形成c-c键。
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1× taq dna 连接酶反应缓冲液
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合成酶，能催化两个分子连接成一个分子或把一个分子的尾相连接的酶。此反应与atp的分解反应相偶联。在把两分子相连接的同时发生三磷酸腺苷（atp)的高能磷酸键的断裂如dna连接酶等。
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