操作步骤:
1、打开pcr仪的热盖,插入0.2ml的样品管。盖好热盖。
2、打开pcr仪的电源,仪器程序开始初始化,需等待几分钟。
3、初始化完成后,显示主菜单:
4、点“browse/new methods”,进入pcr程序列表:
5、可以直接点一个pcr程序,选择“start run”运行;点右边的符号,可以选 择不同的文件夹。如要新建一个pcr程序,点“new”,出现pcr程序:
6、添加一段程序:点中上方的“stage”位置,该位置变红;再点“add”,软件将加入一段新的程序。
7、修改循环数、温度、时间:点中循环次数、温度或时间位置,下方出现数字键。依次点数字键,出现合适数字后,点“done”确定。
8、增加一个步骤:点“step”位置,该位置变红;再点“add”,软件将加入一个新的步骤。
9、删除一个步骤:点“step”位置,在点“delete”,软件将该步骤删除。
10、建立梯度模式:
1)点中一个步骤,再点“option”键,出现选项如下
2)点“veriflex step”,出现梯度创建窗口:
输入6个梯度温度,温度下方的“1-2”是指对应的1、2两行加热孔,全部输好后,点“done”确定。注意:相邻的两个梯度温度之差不能*过5℃!
11、建立渐变模式:
1)点中一个步骤,再点“option”键,出现选项如下
2)点“auto delta”,出现渐变模式创建窗口。
点“staring cycle”,输入起始循环数;点“delta temperature”,输入温度变化值;点“delta time”,输入时间变化值。渐变模式适用于touchdown pcr,可以提高pcr反应的特异性。例:输入起始循环数为2,温度变化值为+0.5℃,时间变化值为+5s,则表示从第2个循环开始,每循环一次升温0.5℃,时间增加5s。
12、增加暂停步骤:
1)点中一个步骤,再点“option”键,出现选项如下
2)点“pause”,出现如下窗口。
输入暂停的起始位置,暂停间隔和暂停时间,点“done”确定。上图表示每隔10个循环暂停10s,在10个循环的第1个循环之前暂停。
13、编辑pcr程序完成后,点“save”保存。
点“run method”,输入pcr程序名称;点 ,选择保存pcr程序的文件夹(如 果要保存在usb文件夹中,需要先插u盘)。再输入反应体积和热盖温度(这两项在运行程序时可以修改)。点“saveδexit”确定。
14、回到pcr程序列表界面,选择新建的pcr程序。
15、点“start run”,出现运行参数设置窗口
输入反应体积和热盖温度,点“start run now”开始运行pcr程序。
16、仪器运行选中的pcr程序,显示运行监视窗口
a- 运行状态栏,显示运行温度和剩余时间
b- 加热警示标记
c- 阶段指示
d- 步骤温度
e- 步骤时间
f- 步骤指示
c- 状态报告,显示日期、时间和仪器状态
d- 延伸箭头,点箭头可以显示更多的步骤
16、暂停运行: 点“pause run”,仪器暂停,出现暂停选项栏
“remaining time”显示暂停剩余时间,“elapse time”显示已暂停时间。
如果需要修改暂停时间,点 ,输入时间值,点“done”确定;点“resume run”, 结束暂停,继续运行pcr程序。
7、终止运行:点“stop”可以终止整个pcr程序。
18、反应报告:
pcr程序结束后,仪器会自动生成反应报告,显示当次反应的各项指数。该报告可以保存和打印。
19、pcr反应结束后,打开热盖,取出样品,关闭仪器电源。并开盖放置,使热盖和加热模块正常降温
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