双抗体夹心法与间接法
双抗体夹心法：
(1) 包被：用0.05m ph9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反响孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗刷缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗刷，下同)。
(2) 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反响孔中，置37℃孵育1小时。然后洗刷。(一起做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。
(3) 加酶标抗体：于各反响孔中，参加新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗刷。
(4) 加底物液显色：于各反响孔中参加暂时制造的tmb底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。
(5) 停止反响：于各反响孔中参加2m硫酸0.05ml。
(6) 成果断定：可于白色背景上，直接用肉眼调查成果：反响孔内色彩越深，阳性程度越强，阴性反响为无色或极浅，根据所呈色彩的深浅，以“+、“-号表示。也可测o·d值：在elisa检测仪上，于450nm(若以abts显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔o·d值，若大于规定的阴性对照od值的2.1倍，即为阳性。
间接法：
用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗刷3次。加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反响孔中,置37℃孵育1小时,洗刷。(一起做空白、阴性及阳性孔对照)于反响孔中，参加新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml，37℃孵育30-60分钟，洗刷,zui后一遍用ddw洗刷。其余过程同“双抗体夹心法的4、5、6。
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(3) 加酶标抗体：于各反响孔中，参加新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗刷。
(4) 加底物液显色：于各反响孔中参加暂时制造的tmb底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。
(5) 停止反响：于各反响孔中参加2m硫酸0.05ml。
(6) 成果断定：可于白色背景上，直接用肉眼调查成果：反响孔内色彩越深，阳性程度越强，阴性反响为无色或极浅，根据所呈色彩的深浅，以“+、“-号表示。也可测o·d值：在elisa检测仪上，于450nm(若以abts显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔o·d值，若大于规定的阴性对照od值的2.1倍，即为阳性。
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