怎么建稳转株才能真的稳？
稳定转染，即进入细胞的质粒整合入细胞基因组中，并能随细胞分裂稳定传递下去。这是相对瞬时转染而言的。
瞬时转染的表达时间短暂，外源基因导入整合基因组的几率非常低，绝大部分以游离形式存在，不能随细胞分裂而一同复制，导致后拷贝数被稀释，无法达到持续表达外源基因的目的。一般用转染试剂进行质粒转染，多为瞬时转染。
一般如下情况需要构建稳定株
1. *在目的细胞中研究基因功能，通过构建稳定株，可以大大降低频繁转染或者病毒包装的成本，也*方便实验研究；
2. 部分蛋白半衰期极长，瞬时 rna 只能干扰表达，无法去除已经表达的目的蛋白，通过构建稳定株可以实现更好的基因干扰效果；
3. 瞬转往往会引入*拷贝数的表达，导致因为人为因素造成实验结果的不精确，构建稳定株可以帮助筛选拷贝数适量的细胞进行实验研究；
4. 需要用诱导表达系统的，主要是一些致死基因或者是需要时空表达的；
5. 需要用细胞做动物实验的，比如裸鼠成瘤等，往往需要构建成稳转株。
构建稳定株的方法
其实用脂质体转染、磷酸钙转染法等理论上是可以构建稳定株的，但这些方法整合入基因组的效率极低，很难成功。而慢病毒可以携带外源基因随机整合进基因组，效率很高，是建立稳定株的-优方式。
构建稳定株的注意点
稳定株构建是个*过程，从质粒构建到慢病毒包装，再到细胞感染及后期的筛选，每一步都至关重要，所以建立稳转株花个半年时间，也是常有的事，而且要承担病毒包装不成功，细胞感染效率低等风险。
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