中压分离层析柱的操作和硅胶柱层析管用的方法
本文主要是来谈谈中压分离层析柱的操作和硅胶柱层析管用的方法，想要了解的朋友就来看看吧。
以中压柱层析法提取分离冬凌草甲素为例
1 吸附剂的处理及柱子装填
将一定量薄层层析硅胶装人搪瓷盘置于烘箱中，于105。c活化2h后，取出放置室温即可装柱。柱子采用干法填充，填满整个柱体，不留死体积，密封后用柱塞式计量溶剂泵按丙酮一石油醚（5：95）比例泵人溶剂，至溶剂流出止。
2 上样
将冬凌草的乙醇提取物400g用适量丙酮溶解，泵人中压柱柱头，然后泵人石油醚1000rid。
3 洗脱
以一定比例的石油醚一丙酮为洗脱液，60ml／min的流速进行梯度洗脱，柱的使用压力为2～ 3kg／c 。按每份500ml收集，tlc检识展开剂丙酮一氯仿（2：8），显色剂5％*浓硫酸乙醇液
至洗脱*，相同流份合并，回收溶剂。将冬凌草甲素流份合并蒸干。加人适量甲醇热溶后自然放置，析出结晶，为冬凌草甲素。
4 层析柱再生、平衡
有效成分经tlc检识全部流出后，用纯丙酮5000ml再生，丙酮一石油醚（5：95）平衡后，可再次上样，反复使用（使用次数随原料不同而异，一般可连续使用2—6个月以上）。
5 重结晶
冬凌草甲素结晶析出*后，减压过滤，然后用少量甲醇洗涤（洗涤液保留，作下次热溶冬凌草甲素用）。将冬凌草甲素再用适量甲醇热溶后放置，结晶再次析出，待结晶*后，抽滤，用少量乙醚洗涤，将结晶室温下晾干后置真空干燥箱中，35度真空干燥至恒重。密封于瓶中，置干燥器中保存。
6 薄层层析分析
取适量冬凌草甲素对照品及由上述方法得到的冬凌草甲素样品甲醇溶解后点于同一硅胶g薄层板上，以氯仿一丙酮（8：2）为展开剂进行展开，5％ *浓硫酸乙醇液显色，于105。c烘至斑点清晰。表明在该展开系统下，冬凌草甲素样品和对照品都具有相同的rf值，并呈现出同样的蓝绿色斑点，在制备的冬凌草甲素样品中，没有杂质斑痕。
硅胶柱层析流动相
极性小的用乙酸乙酯：石油醚系统；极性较大的用甲醇：氯仿系统；极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系统；拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸
硅胶柱层析惯用方法
1.称量。200-300目硅胶，称30-70倍于上样量；如果极难分，也可以用100倍量的硅胶h。干硅胶的视密度在0.4左右，所以要称40g硅胶，用烧杯量100ml也可以。
2.搅成匀浆。加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿/醇体系，就用氯仿拌。如果不能搅成匀浆，说明溶剂中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话，必须预先用*久置干燥。氯仿用无水氯化钙干燥，以除去1%的醇。如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过柱。
3.装柱。将柱底用棉花塞紧，不*海沙，加入约1/3体积石油醚（氯仿），装上蓄液球，打开柱下活塞，将匀浆一次倾入蓄液球内。随着沉降，会有一些硅胶沾在蓄液球内，用石油醚（氯仿）将其冲入柱中。
4.压实。沉降完成后，加入更多的石油醚，用双联球或气泵加压，直至流速恒定。柱床约被压缩至9/10体积。无论走常压柱或加压柱，都应进行这一步，可使分离度提高很多，且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂。
5.上样。干法湿法都可以。海沙是没必要的。上样后，加入一些洗脱剂，再将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面。然后就可以放心地加入大量洗脱剂，而不会冲坏硅胶表面。
6.过柱和收集。柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡。太低的洗脱强度并不好，*用梯度洗脱。收集的例子：10mg上样量，1g硅胶h，0.5ml收一馏分；1-2g上样量，50g硅胶（200-300目），20-50ml收一馏分。
7.检测。要更多地使用喷显剂，如果仅用紫外灯，会损失较多产品，紫外的灵敏度一般比喷显剂底1-2个数量级。
8.送谱。收集的产品旋干，在送谱前通常需要重结晶。如果样品太少或为液体，可过一小凝胶柱，作为送谱前的zui后纯化手段。可除去氢谱1.5ppm左右所谓的“硅胶”峰。
注意事项
1.先根据tlc方法筛选好洗脱剂，使两相邻物质rf值之差zui大化
2.将柱子必须装平整、均匀
3.考虑有限柱填料的吸附量
4.可考虑用剃度法分开并洗脱
土壤有机质含量测定仪器的应用优势
双通道独立控制注射泵的操作流程
HG5-16-79搪瓷放料阀之产品维护保养与安装使用注意事项
数控车床送料机的作用，车铣复合机床送料机的特点
我国大力发展木本油料提升食用油自给率 核桃加工机械迎机遇
中压分离层析柱的操作和硅胶柱层析管用的方法
激光焊接的车一定更安全吗？激光焊接真的更结
E3630A电源E3631A美国安捷伦Agilent选购指南
车载小型吸粮机
紫外线老化试验箱要检测多长时间才相当于户外曝晒一年呢？
重庆KP820便携式单一气体检测仪厂家供应
高速加工用双面接触和三面接触刀柄系统
刚买的真空包装机怎么安装？
软化水设备树脂的交换过程与清洗再生
脱硫风机价格
隔膜阀用途与特点
什么是多工位插拔力试验机？
沥青复合胎柔性防水卷材拉力检测设备价格
调温磁力加热搅拌器技术性能介绍
家禽脱毛机工作原理
以中压柱层析法提取分离冬凌草甲素为例
1 吸附剂的处理及柱子装填
将一定量薄层层析硅胶装人搪瓷盘置于烘箱中，于105。c活化2h后，取出放置室温即可装柱。柱子采用干法填充，填满整个柱体，不留死体积，密封后用柱塞式计量溶剂泵按丙酮一石油醚（5：95）比例泵人溶剂，至溶剂流出止。
2 上样
将冬凌草的乙醇提取物400g用适量丙酮溶解，泵人中压柱柱头，然后泵人石油醚1000rid。
3 洗脱
以一定比例的石油醚一丙酮为洗脱液，60ml／min的流速进行梯度洗脱，柱的使用压力为2～ 3kg／c 。按每份500ml收集，tlc检识展开剂丙酮一氯仿（2：8），显色剂5％*浓硫酸乙醇液
至洗脱*，相同流份合并，回收溶剂。将冬凌草甲素流份合并蒸干。加人适量甲醇热溶后自然放置，析出结晶，为冬凌草甲素。
4 层析柱再生、平衡
有效成分经tlc检识全部流出后，用纯丙酮5000ml再生，丙酮一石油醚（5：95）平衡后，可再次上样，反复使用（使用次数随原料不同而异，一般可连续使用2—6个月以上）。
5 重结晶
冬凌草甲素结晶析出*后，减压过滤，然后用少量甲醇洗涤（洗涤液保留，作下次热溶冬凌草甲素用）。将冬凌草甲素再用适量甲醇热溶后放置，结晶再次析出，待结晶*后，抽滤，用少量乙醚洗涤，将结晶室温下晾干后置真空干燥箱中，35度真空干燥至恒重。密封于瓶中，置干燥器中保存。
6 薄层层析分析
取适量冬凌草甲素对照品及由上述方法得到的冬凌草甲素样品甲醇溶解后点于同一硅胶g薄层板上，以氯仿一丙酮（8：2）为展开剂进行展开，5％ *浓硫酸乙醇液显色，于105。c烘至斑点清晰。表明在该展开系统下，冬凌草甲素样品和对照品都具有相同的rf值，并呈现出同样的蓝绿色斑点，在制备的冬凌草甲素样品中，没有杂质斑痕。
硅胶柱层析流动相
极性小的用乙酸乙酯：石油醚系统；极性较大的用甲醇：氯仿系统；极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系统；拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸
硅胶柱层析惯用方法
1.称量。200-300目硅胶，称30-70倍于上样量；如果极难分，也可以用100倍量的硅胶h。干硅胶的视密度在0.4左右，所以要称40g硅胶，用烧杯量100ml也可以。
2.搅成匀浆。加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿/醇体系，就用氯仿拌。如果不能搅成匀浆，说明溶剂中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话，必须预先用*久置干燥。氯仿用无水氯化钙干燥，以除去1%的醇。如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过柱。
3.装柱。将柱底用棉花塞紧，不*海沙，加入约1/3体积石油醚（氯仿），装上蓄液球，打开柱下活塞，将匀浆一次倾入蓄液球内。随着沉降，会有一些硅胶沾在蓄液球内，用石油醚（氯仿）将其冲入柱中。
4.压实。沉降完成后，加入更多的石油醚，用双联球或气泵加压，直至流速恒定。柱床约被压缩至9/10体积。无论走常压柱或加压柱，都应进行这一步，可使分离度提高很多，且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂。
5.上样。干法湿法都可以。海沙是没必要的。上样后，加入一些洗脱剂，再将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面。然后就可以放心地加入大量洗脱剂，而不会冲坏硅胶表面。
6.过柱和收集。柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡。太低的洗脱强度并不好，*用梯度洗脱。收集的例子：10mg上样量，1g硅胶h，0.5ml收一馏分；1-2g上样量，50g硅胶（200-300目），20-50ml收一馏分。
7.检测。要更多地使用喷显剂，如果仅用紫外灯，会损失较多产品，紫外的灵敏度一般比喷显剂底1-2个数量级。
8.送谱。收集的产品旋干，在送谱前通常需要重结晶。如果样品太少或为液体，可过一小凝胶柱，作为送谱前的zui后纯化手段。可除去氢谱1.5ppm左右所谓的“硅胶”峰。
注意事项
1.先根据tlc方法筛选好洗脱剂，使两相邻物质rf值之差zui大化
2.将柱子必须装平整、均匀
3.考虑有限柱填料的吸附量
4.可考虑用剃度法分开并洗脱
土壤有机质含量测定仪器的应用优势
双通道独立控制注射泵的操作流程
HG5-16-79搪瓷放料阀之产品维护保养与安装使用注意事项
数控车床送料机的作用，车铣复合机床送料机的特点
我国大力发展木本油料提升食用油自给率 核桃加工机械迎机遇
中压分离层析柱的操作和硅胶柱层析管用的方法
激光焊接的车一定更安全吗？激光焊接真的更结
E3630A电源E3631A美国安捷伦Agilent选购指南
车载小型吸粮机
紫外线老化试验箱要检测多长时间才相当于户外曝晒一年呢？
重庆KP820便携式单一气体检测仪厂家供应
高速加工用双面接触和三面接触刀柄系统
刚买的真空包装机怎么安装？
软化水设备树脂的交换过程与清洗再生
脱硫风机价格
隔膜阀用途与特点
什么是多工位插拔力试验机？
沥青复合胎柔性防水卷材拉力检测设备价格
调温磁力加热搅拌器技术性能介绍
家禽脱毛机工作原理