ibidi可移除腔室载玻片的一片高效多功能应用
ibidi 3孔/8孔/12孔可移除腔室载玻片为实验培养mcf-7细胞提供了一种简单且高效的实验方案~
实验方案：
细胞培养，固定，染色和成像观察--都是在一个开放型小室中搞定：
实验步骤1：
必须在预实验中确定细胞系的正确接种浓度。根据您的细胞类型，用4-6x104细胞/ ml在2-3天内产生汇合的单层。
1.在无菌条件下，打开8孔可移除腔室载玻片（ibidi，80841）包装。
2.像往常一样用胰蛋白酶消化并计数细胞。细胞浓度为5×104细胞/ ml mcf-7。
3. 将400微升细胞悬浮液加入腔室的每个孔中。避免摇晃，因为这会导致细胞分布不均匀。
4. 用配套的盖子盖住。在37°c和5％co2下培养。细胞至少培养24小时，或直到建立融合的单层。
实验步骤2：
固定是染色程序的第一步。目标是将细胞，细胞形成物或组织维持在其当前状态，并在较长时间内通过化学试剂保存。
1.小心地吸出细胞培养基。
2.用pbs洗两次。
3.加入400μl福尔马林溶液。
4.在室温下孵育30分钟。
5.小心吸入福尔马林溶液。
6.用pbs洗涤三次。
实验步骤3：
应根据感兴趣的细胞结构选择染色试剂。在该方案中使用dapi和dye-490鬼笔环肽染色mcf-7细胞的细胞核和肌动蛋白骨架。
1.准备你的染色溶液：pbs、dye-490鬼笔环肽、dapi 1μg/ml
2.小心吸出pbs。
3.移取400μl染色溶液到每个孔中
4.在室温下避光孵育30分钟
实验步骤4：
染色后清洗样本可最大限度地减少背景信号
1.小心地吸出染色溶液
2.加入400μl缓冲液
3.小心地吸出缓冲液
4.重复步骤2和步骤3至少一次
实验步骤5：
从一个边缘开始，用手或用镊子小心地取下硅胶垫圈。该步骤应以缓慢，稳定的进行，以避免损坏细胞层。
实验步骤6：
完成染色程序后，必须在用显微镜成像之前封固样品。该步骤还可防止样品脱水。
1.将载玻片侧面在干净的实验室湿巾上轻敲，去除样品中多余的介质。
2.将封固剂涂在样品上。用24 x 60毫米的盖玻片覆盖安装好的样品，小心地将盖玻片放到安装介质上，以避免夹住任何气泡。tip：建议使用硬化封片剂，如fluoroshieldtm (sigma-aldrich), vectashield? (vector laboratories inc.), or prolong antifade? (thermofisher scientific)。
3.等封片剂固定好。
实验步骤7：显微观察
在可移除8孔腔室载玻片中免疫染色的mcf-7细胞的荧光显微镜检查。绿色：α-微管蛋白，红色：f-肌动蛋白（鬼笔环肽），蓝色：细胞核 (dapi)。使用20倍物镜拍摄宽场荧光图像。
ibidi提供了一种简单且经济高效的方案，使用一片可移除的腔室载玻片可进行细胞的培养，固定和染色，无需爬片，是倒置/正置显微镜以及长期样品储存的理想选择。
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2.像往常一样用胰蛋白酶消化并计数细胞。细胞浓度为5×104细胞/ ml mcf-7。
3. 将400微升细胞悬浮液加入腔室的每个孔中。避免摇晃，因为这会导致细胞分布不均匀。
4. 用配套的盖子盖住。在37°c和5％co2下培养。细胞至少培养24小时，或直到建立融合的单层。
实验步骤2：
固定是染色程序的第一步。目标是将细胞，细胞形成物或组织维持在其当前状态，并在较长时间内通过化学试剂保存。
1.小心地吸出细胞培养基。
2.用pbs洗两次。
3.加入400μl福尔马林溶液。
4.在室温下孵育30分钟。
5.小心吸入福尔马林溶液。
6.用pbs洗涤三次。
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2.小心吸出pbs。
3.移取400μl染色溶液到每个孔中
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1.小心地吸出染色溶液
2.加入400μl缓冲液
3.小心地吸出缓冲液
4.重复步骤2和步骤3至少一次
实验步骤5：
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1.将载玻片侧面在干净的实验室湿巾上轻敲，去除样品中多余的介质。
2.将封固剂涂在样品上。用24 x 60毫米的盖玻片覆盖安装好的样品，小心地将盖玻片放到安装介质上，以避免夹住任何气泡。tip：建议使用硬化封片剂，如fluoroshieldtm (sigma-aldrich), vectashield? (vector laboratories inc.), or prolong antifade? (thermofisher scientific)。
3.等封片剂固定好。
实验步骤7：显微观察
在可移除8孔腔室载玻片中免疫染色的mcf-7细胞的荧光显微镜检查。绿色：α-微管蛋白，红色：f-肌动蛋白（鬼笔环肽），蓝色：细胞核 (dapi)。使用20倍物镜拍摄宽场荧光图像。
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