环境样品通用 DNA/RNA 提取试剂盒说明书

highlights
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可从粪便,土壤,水样,生物膜,拭子,唾液,生物体液中快速提取到高纯度的 dna/rna(含 micro rna)。
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该产品创新的裂解体系可以裂解格兰仕阳性菌,阴性菌,原生生物,藻类,真菌,病毒。
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获得的 dna/rna,产量高、纯度好,可以直接用高通量测序等下游分子生物学实验。
试剂盒组成
保存
50 次
裂解管
室温
50 个
核酸保护剂
室温
50 ml
dna/rna 裂解液
室温
50 ml
dna/rna 预洗液
室温
2x25 ml
dna/rna 洗涤液
室温
2x24 ml
抑制物去除液
室温
3x30 ml
dnase/rnase free water
室温
30 ml
dnase i(选配)
-20℃
1 管
dna 消化液(选配)
室温
4 ml
抑制物去除柱
室温
100 个
3 号柱 y(黄色)
室温
50 个
3 号柱 g(绿色)
收集管(2ml)
室温
50 个
室温
300 个
note –售出后一年内产品质量是可以保证。 试剂已经过大量的常规检测来保证其可操作性。此产品仅供研究并且需要由专业人员来使用。
试剂盒中的部分试剂是有刺激性的。 请带好手套和防护眼镜。
特性:
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样品:可有效的从 200mg 以内的哺乳动物粪便,250mg 以内土壤,200mg 以内植物/种子和 50-100mg(湿
重)的真菌细菌细胞, 生物膜和水样中有效的提取到细菌,真菌,原生生物,病毒,线粒体和宿主 rna,
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纯度: 获得的 dna/rna 产量高、纯度好,a260/a280>1.8, a260/a230>1.8,提供 dnase i 去除痕量的
dna,得到的 dna/rna 可应用于高通量测序等各种分子生物学实验。
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大小:可回收到 dna 和≥17 核苷酸的 rna。
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产量:3 号 g 的最大结合能力为 100μg
试剂制备
dna/rna 洗涤液 在使用之前一定要配好,添加好乙醇后在试剂瓶上做好标记!!!
需要添加 96ml100%的乙醇(或 104ml95%乙醇)到 24ml 的 dna/rna 洗涤液 中
溶解冻干粉状态的dnase i需要按照管子上的量添加 rnase-free h2o
一般250u的dnase i 需要添加275μl的dnase/rnase-free h2o,终浓度为1u/μl
操作步骤:
整个操作步骤是由2个步骤组成:(i)样品裂解匀浆(i i) 核酸纯化
(i)样品裂解匀浆
以下离心步骤均在 10,000-16,000 x g 下室温(20-30℃)离心 30 秒,如无特殊说明。
1.直接添加样品到裂解管中,然后添加 750μl 的核酸保护剂到裂解管中,拧紧盖子防止泄漏,如果样品已经保存
在添加了核酸保护剂的耗材中,则直接进行第二步。
2.在涡旋仪上最大速下振荡 5 分钟混匀。(如果使用高频振荡器时间可以适当缩短)
3.离心裂解管 1 分钟
环境样品通用 dna/rna 提取试剂盒
catalog no. tr202-50 (50 次反应)
highlights
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可从粪便,土壤,水样,生物膜,拭子,唾液,生物体液中快速提取到高纯度的 dna/rna(含 micro rna)。
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该产品创新的裂解体系可以裂解格兰仕阳性菌,阴性菌,原生生物,藻类,真菌,病毒。
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获得的 dna/rna,产量高、纯度好,可以直接用高通量测序等下游分子生物学实验。
产品组成:
试剂盒组成
保存
50 次
裂解管
室温
50 个
核酸保护剂
室温
50 ml
dna/rna 裂解液
室温
50 ml
dna/rna 预洗液
室温
2x25 ml
dna/rna 洗涤液
室温
2x24 ml
抑制物去除液
室温
3x30 ml
dnase/rnase free water
室温
30 ml
dnase i(选配)
-20℃
1 管
dna 消化液(选配)
室温
4 ml
抑制物去除柱
室温
100 个
3 号柱 y(黄色)
室温
50 个
3 号柱 g(绿色)
收集管(2ml)
室温
50 个
室温
300 个
note –售出后一年内产品质量是可以保证。 试剂已经过大量的常规检测来保证其可操作性。此产品仅供研究并且需要由专业人员来使用。
试剂盒中的部分试剂是有刺激性的。 请带好手套和防护眼镜。
特性:
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样品:可有效的从 200mg 以内的哺乳动物粪便,250mg 以内土壤,200mg 以内植物/种子和 50-100mg(湿
重)的真菌细菌细胞, 生物膜和水样中有效的提取到细菌,真菌,原生生物,病毒,线粒体和宿主 rna,
?
纯度: 获得的 dna/rna 产量高、纯度好,a260/a280>1.8, a260/a230>1.8,提供 dnase i 去除痕量的
dna,得到的 dna/rna 可应用于高通量测序等各种分子生物学实验。
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大小:可回收到 dna 和≥17 核苷酸的 rna。
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试剂制备
dna/rna 洗涤液 在使用之前一定要配好,添加好乙醇后在试剂瓶上做好标记!!!
需要添加 96ml100%的乙醇(或 104ml95%乙醇)到 24ml 的 dna/rna 洗涤液 中
溶解冻干粉状态的dnase i需要按照管子上的量添加 rnase-free h2o
一般250u的dnase i 需要添加275μl的dnase/rnase-free h2o,终浓度为1u/μl
操作步骤:
整个操作步骤是由2个步骤组成:(i)样品裂解匀浆(i i) 核酸纯化
(i)样品裂解匀浆
以下离心步骤均在 10,000-16,000 x g 下室温(20-30℃)离心 30 秒,如无特殊说明。
1.直接添加样品到裂解管中,然后添加 750μl 的核酸保护剂到裂解管中,拧紧盖子防止泄漏,如果样品已经保存
在添加了核酸保护剂的耗材中,则直接进行第二步。
2.在涡旋仪上最大速下振荡 5 分钟混匀。(如果使用高频振荡器时间可以适当缩短)
3.离心裂解管 1 分钟。
样品类型
最大输入量
粪便
200mg
土壤
250mg
植物/种子
200 mg
液体样品
250μl
细胞(重悬在核酸保护剂中
或pbs等液体内)
50-100 mg
(2x109细菌,2x108酵母细胞,2x107哺
乳动物细胞动物细胞)
样本保存液配套产品
4.将上一步所得上清(最多 400μl)加到一个干净的 rnase-free 的离心管里。
5.直接添加 2 倍体积的 dna/rna 裂解液(~800μl)到离心管里混匀。
(i i) 核酸纯化
以下离心步骤均在 10,000-16,000 x g 下室温(20-30℃)离心 30 秒,如无特殊说明。
针对不同的目的采用方案 a 或方案 b 进行样品纯化。
方案 a 总核酸(dna 和 rna)纯化步骤
1. 添加等体积的乙醇(95%-100%)~1200μl 混匀。
2. 将上述混合物放入套在收集管上的3号柱y(黄色)里,离心。去除滤出液。
3. 添加400μl的dna/rna预洗液到3号柱y(黄色)里,离心。去除滤出液。
4. 添加400μl的dna/rna洗涤液到3号柱y(黄色)里,离心。去除滤出液。将柱子放入一个干净的1.5ml离心管
内。
5. 在吸附膜的中间部位加100μl rnase-free 水,静置5分钟,离心洗脱粗提的总核酸(dna和rna)。
6. 添加2倍体积(~200μl)的dna/rna裂解液到粗提的总核酸中,混匀。
7. 添加等体积的乙醇(95%-100%)~300μl,混匀。
8. 将混合物添加到一个放入套在收集管上的3号柱g里,离心。去除滤出液。
9. 添加400μl的dna/rna预洗液到3号柱g(绿色)里,离心。去除滤出液。
10. 添加700μl的dna/rna洗涤液到3号柱g(绿色)里,离心。去除滤出液。
11. 添加400μl的dna/rna洗涤液到3号柱g(绿色)里,离心2分钟*去除洗涤液残留。
12. 取出3号柱g,放入一个无rna酶的离心管中,在吸附膜的中间部位加100μl rnase-free 水,静置5分钟,离
心洗脱总核酸(dna和rna).
13. 将抑制物去除柱套在一个收集管内,添加600μl的抑制物去除液,在≥8,000 x g下离心3分钟。
14. 将洗脱的总核酸放入制备好的抑制物去除柱内,抑制物去除柱套在一个干净的1.5ml离心管内, 并在16,000
x g下离心3分钟,得到的总核酸可进行后续试验。
方案 b dna 或 rna 分别纯化步骤
1. 将上述混合物~1200μl放入套在收集管上的3号柱y(黄色)里,离心。保存滤出液用于rna提取。保存柱子
用于dna提取。
dna提取
rna提取
2. 将3号柱y(黄色)套在一个新的收集管。
2. 添加等体积的乙醇(95%-100%)~1200μl 混
匀。将上述混合物放入套在收集管上的 3 号柱
g(绿色)里,柱子的最大承载体积是 700μl,反
复离心。去除滤出液。
(此步骤之后可选做dnase i 处理)
3. 添加400μl的dna/rna预洗液到柱里,离心。去除滤出液。
4. 添加700μl的dna/rna洗涤液到柱里,离心。去除滤出液。
5. 添加400μl的dna/rna洗涤液到柱里,离心。去除滤出液。将柱子放入一个干净的1.5ml离心管内。
6. 在吸附膜的中间部位加100μl rnase-free 水,静置5分钟,离心洗脱dna或rna。
7. 将抑制物去除柱套在一个收集管内,添加600μl的抑制物去除液,在≥8,000 x g下离心3分钟。
8. 将洗脱的dna或rna放入制备好的抑制物去除柱内,抑制物去除柱套在一个干净的1.5ml离心管内,并在
16,000 x g下离心3分钟,得到的总核酸可进行后续试验。
dnase i处理(选做)
1. 在rna提取第2步后,添加400μl的dna/rna洗涤液到柱里,离心。去除滤出液。
2. 针对每一次提取 配置 80μl的dnase i反应体系(75μl 的dna消化液和5μl的dnase i溶液)。
3. 添加80μl 的dnase i体系到柱基质上,然后在室温下(20-30℃)孵育15分钟。然后进行下面的步骤完成rna
的提取。

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