MicBio-II酶标板恒温振荡器在禽肉中药残的快速检测使用
近年来，在对外出口畜禽食用产品时，对残留的检测成为*的检测指标。国外一般要求畜禽食用产品中不得超过1 ng／ml，这对检测手段的灵敏度提出了很高的要求。目前我国国内常用的检测药残的方法是使用液相法或气相色谱法来对其进行检测，但这种检测方法对样品的处理比较复杂，对实验操作技术要求很高，不利于在基层生产单位推广应用。本实验根据酶联免疫吸附（elisa）借助于残留快速检测试剂盒对鸡肉组织残留的进行检测，处理简单，操作步骤简便，可以快速有效地测定出肉品中的残留量，其对检测的灵敏度可以达到
0．03 ng／ml的水平。
1 材料
1．1 被检样品市场上随机抽取的鸡肉样品，共92份。
1．2 快速检测试剂盒购自合肥艾本森科学仪器有限公司，美国neogen公司生产，其组成为：（1）酶标板，抗体包被；（2）标准溶液；（3）酶标结合物；（4）酶标结合物稀释液；（5）底物溶液；（6）
反应终止液；（7）标样／试样稀释液；（8）清洗液。以上各试剂4c保存，使用时回升至室温。micbio-ii酶标板恒温振荡器，abson公司生产，
2 检测方法
2．1 肉样的处理方法（1）从被检测的肉样中取5 g样品放入研钵中研磨成肉浆，用量筒量取20 ml pbs
缓冲液（ph7．2）倒入肉浆中，然后将其倒入5mi大离心管中。（2）将离心管在震荡器上剧烈震荡1 min，使pbs缓冲液充分发挥作用。（3）在15℃的条件下以3 000转／min，离心15 min。（4）离心后取0．2 ml上
层液用0．2 ml标样／试样稀释液稀释。
2．2 检测程序按照1：100稀释酶标结合物。用移液管移取100 ul经过稀释的标准液或样品到相应的微量滴定板孔中，每孔中再加入50ul经过稀释的酶标结合物。盖上塑料膜后，将酶标板放入micbio-ii酶标板恒温振荡器，温育120 min。洗板3次：向每个孔中加入300ul清洗液，倒掉孔中的溶液，然后在纸巾上拍击酶标板，重复以上步骤3次（如果冲洗不会影响检测结果）。向反应孔中加入100 ul底物溶液，进行显色反应。让反应在室温下暗处充分进行30 min。到时间后向反应孔中加入100ul 1 m 的硫酸（反应终止液），颜色由兰色变成黄色。充分混匀后，用酶标仪在450 nm 波长处检测吸光度（od值）。颜色在30 min内稳定。
3 结果
根据酶标仪测定数据，将各样品吸光度与标准溶液的吸光度对比，有20个样品含量在低
于0．5ng／g，有28个肉样含量在0．5～1．0ng／g之间，有l8个肉样含量在1～5ng／g之间，有16个肉样含量在5～10ng／g之间有，7个肉样含量在10～50ng／g之间，有3个肉样的含量大于50ng／g，被检92份鸡肉样品中47．83％的样品含量超标（≥1 ng/g）。
4 讨论
是一种广谱抗生索，具有较强的抗菌杀菌作用，由于价格比较便宜且治疗效果比较明显，过去在畜禽养殖中被广泛应用。但食品中对人体的缝康会造成严重的影响，如再生障碍性贫血及粒状细胞缺乏症，新生儿、早产儿灰婴综合征等。因此，粮农组织／世界卫生组织食品添加剂专家委员会建议禁止此药使用于食用动物，美国、加拿大以及欧共体各国已严格控制将其用于食用动物。由于历史的原因，目前我国应用含有成分的药物仍不在少数。为了维护人体健康，扩大我国的肉制品外贸出口，解决在畜禽肉制品以及水产品中的残留问题，除用药、制定动物的停药期外，也需要加强检测研究。肉类产品巾微生物检测法，检出的zui低浓度为0．25～5．00 ng／ml。气相或液相色谱的测定灵敏度虽能达到10 n g／ml，但其对样品的处理比较复杂，对实验操作人员的要求很高，稳定性与重复性均比较差，不利于在基层生产单位推广应用。应用elisa法检测残留的灵敏度可达0．03 ng／ml的水平，是常规方法的数百倍，而且操作简便，检测迅速。本方法不仅可用于各种肉制品中残留的检测，而且可以用来检测牛奶、蜂蜜、奶粉等，且结果稳定，重复性好，值得推广应用。
关键词：快速检测试剂 恒温振荡器 振荡器 酶标仪
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0．03 ng／ml的水平。
1 材料
1．1 被检样品市场上随机抽取的鸡肉样品，共92份。
1．2 快速检测试剂盒购自合肥艾本森科学仪器有限公司，美国neogen公司生产，其组成为：（1）酶标板，抗体包被；（2）标准溶液；（3）酶标结合物；（4）酶标结合物稀释液；（5）底物溶液；（6）
反应终止液；（7）标样／试样稀释液；（8）清洗液。以上各试剂4c保存，使用时回升至室温。micbio-ii酶标板恒温振荡器，abson公司生产，
2 检测方法
2．1 肉样的处理方法（1）从被检测的肉样中取5 g样品放入研钵中研磨成肉浆，用量筒量取20 ml pbs
缓冲液（ph7．2）倒入肉浆中，然后将其倒入5mi大离心管中。（2）将离心管在震荡器上剧烈震荡1 min，使pbs缓冲液充分发挥作用。（3）在15℃的条件下以3 000转／min，离心15 min。（4）离心后取0．2 ml上
层液用0．2 ml标样／试样稀释液稀释。
2．2 检测程序按照1：100稀释酶标结合物。用移液管移取100 ul经过稀释的标准液或样品到相应的微量滴定板孔中，每孔中再加入50ul经过稀释的酶标结合物。盖上塑料膜后，将酶标板放入micbio-ii酶标板恒温振荡器，温育120 min。洗板3次：向每个孔中加入300ul清洗液，倒掉孔中的溶液，然后在纸巾上拍击酶标板，重复以上步骤3次（如果冲洗不会影响检测结果）。向反应孔中加入100 ul底物溶液，进行显色反应。让反应在室温下暗处充分进行30 min。到时间后向反应孔中加入100ul 1 m 的硫酸（反应终止液），颜色由兰色变成黄色。充分混匀后，用酶标仪在450 nm 波长处检测吸光度（od值）。颜色在30 min内稳定。
3 结果
根据酶标仪测定数据，将各样品吸光度与标准溶液的吸光度对比，有20个样品含量在低
于0．5ng／g，有28个肉样含量在0．5～1．0ng／g之间，有l8个肉样含量在1～5ng／g之间，有16个肉样含量在5～10ng／g之间有，7个肉样含量在10～50ng／g之间，有3个肉样的含量大于50ng／g，被检92份鸡肉样品中47．83％的样品含量超标（≥1 ng/g）。
4 讨论
是一种广谱抗生索，具有较强的抗菌杀菌作用，由于价格比较便宜且治疗效果比较明显，过去在畜禽养殖中被广泛应用。但食品中对人体的缝康会造成严重的影响，如再生障碍性贫血及粒状细胞缺乏症，新生儿、早产儿灰婴综合征等。因此，粮农组织／世界卫生组织食品添加剂专家委员会建议禁止此药使用于食用动物，美国、加拿大以及欧共体各国已严格控制将其用于食用动物。由于历史的原因，目前我国应用含有成分的药物仍不在少数。为了维护人体健康，扩大我国的肉制品外贸出口，解决在畜禽肉制品以及水产品中的残留问题，除用药、制定动物的停药期外，也需要加强检测研究。肉类产品巾微生物检测法，检出的zui低浓度为0．25～5．00 ng／ml。气相或液相色谱的测定灵敏度虽能达到10 n g／ml，但其对样品的处理比较复杂，对实验操作人员的要求很高，稳定性与重复性均比较差，不利于在基层生产单位推广应用。应用elisa法检测残留的灵敏度可达0．03 ng／ml的水平，是常规方法的数百倍，而且操作简便，检测迅速。本方法不仅可用于各种肉制品中残留的检测，而且可以用来检测牛奶、蜂蜜、奶粉等，且结果稳定，重复性好，值得推广应用。
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