Gelred核酸凝胶染料的使用方法

a. 预制凝胶法
1. 将gelred(10,000x)原液以1:10,000比例加入到熔化的凝胶中,混合均匀。(gelred可在加热后的凝胶冷却至45℃左右时添加。)
2. 倒胶,室温放置等待凝固。
3. 按常规方法上样电泳。
4. 观察染色凝胶使用标准的透照仪(302或312 nm),成像使用溴化乙锭滤光器,sybr或gelstar滤光器凝胶成像也可以得到很好的结果。
5. 未使用的含有gelred的预制凝胶可以重新熔化做胶,为保证最佳荧光信号,酌情添加适量染料。不建议长期储存含有gelred熔化形式的琼脂糖。含有gelred的预制胶可以保存在4℃供下次使用
b. 泡染法
1. 按照常规方法进行凝胶电泳。
2. 稀释 gelred :用水将10,000x储备液稀释3300倍制成3x染色液。通常情况下50ml染色液足够染一小块凝胶。(注:染色液中含有0.1 m nacl能增强灵敏度,但可能会促使凝胶染色出现沉淀。)
3. 把凝胶放于合适的容器,如聚丙烯染色托盘中。添加足量的3x染色液至浸没凝胶。
4. 室温缓慢振荡染色30min。注:最佳染色时间根据凝胶厚度以及琼脂糖浓度不同略有不同。对于含3.5-10%丙烯酰胺的凝胶,染色时间通常介于30min至1h,并随丙烯酰胺含量增加而延长。
5. 不必脱色,必要的话可以水洗以降低背景值。
6. 使用标准的透照仪(302或312 nm)观察染色凝胶,成像使用溴化乙锭滤光器,sybr 或 gelstar滤光器凝胶成像也可以得到很好的结果。

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