2x 长片段PCR 扩增 预混液（ long fragment PCR Master Mix）说明书
使用方法
充分溶解并混匀pcr反应所需的各种溶液。将2x 长片段pcr 扩增 预混液（ long fragment pcr master mix）置于冰浴上或冰盒内。参考下表在冰上设置pcr反应：
component 20ul rxn 25ul rxn 50ul rxn final concentration
2x 长片段pcr 扩增 预混液 10ul 12.5ul 25ul 1 ×
10um forward primer 0.4ul 0.5ul 1.0ul 0.2um
10um reverse primer 0.4ul 0.5ul 1.0ul 0.2um
template dna variable variable variable variable
nuclease-free water to 20ul to 25ul to 50ul
2 . 不同模板最佳反应浓度有所不同，反应体系推荐模板使用量可参见下表。
template dna 20ulrxn 25ul rxn 50ul rxn
genomic dna 4ng-0.4ug 5ng-0.5ug 10ng-1ug
plasmid or vrial 4pg-4ng 5pg-5ng 10pg-10ng
cdna 4pg-0.4ug 5pg-0.5ug 10pg-1ug
3. 用移液器轻轻吹打混匀或轻微vortex混匀，室温离心数秒，使液体积聚于管底。
反应程序
1 .退火温度应根据引物tm值进行调整(50-72℃)。
2. 延伸时间需根据扩增片段的长度和复杂性进行调整。
3. 各设置好的pcr反应管置于pcr仪上，开始pcr反应。
step temp time
initial denaturation 98°c 30 sec
25–35 cycles 98°c 10 sec
50–72 °c 15 sec
72°c 15-30 sec/kb
final extension 72°c 5 min
hold 4–10 °c ∞
运输及保存方法
-20℃ 保存 一年 干冰运输
货号 品名 规格 品牌
78dc10152-1ml 2x 长片段pcr 扩增 预混液（long fragment pcr master mix） 1ml biohub
78dc10152-5ml 2x 长片段pcr 扩增 预混液（long fragment pcr master mix） 5ml biohub
78dc10152-3*5ml 2x 长片段pcr 扩增 预混液（long fragment pcr master mix） 3*5ml biohub
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10um forward primer 0.4ul 0.5ul 1.0ul 0.2um
10um reverse primer 0.4ul 0.5ul 1.0ul 0.2um
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2 . 不同模板最佳反应浓度有所不同，反应体系推荐模板使用量可参见下表。
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genomic dna 4ng-0.4ug 5ng-0.5ug 10ng-1ug
plasmid or vrial 4pg-4ng 5pg-5ng 10pg-10ng
cdna 4pg-0.4ug 5pg-0.5ug 10pg-1ug
3. 用移液器轻轻吹打混匀或轻微vortex混匀，室温离心数秒，使液体积聚于管底。
反应程序
1 .退火温度应根据引物tm值进行调整(50-72℃)。
2. 延伸时间需根据扩增片段的长度和复杂性进行调整。
3. 各设置好的pcr反应管置于pcr仪上，开始pcr反应。
step temp time
initial denaturation 98°c 30 sec
25–35 cycles 98°c 10 sec
50–72 °c 15 sec
72°c 15-30 sec/kb
final extension 72°c 5 min
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运输及保存方法
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货号 品名 规格 品牌
78dc10152-1ml 2x 长片段pcr 扩增 预混液（long fragment pcr master mix） 1ml biohub
78dc10152-5ml 2x 长片段pcr 扩增 预混液（long fragment pcr master mix） 5ml biohub
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