一、大肠埃希氏菌o157:h7的发现和传播
作为人类致病菌的大肠埃希氏菌o157:h7初发现于1982年,它可产生志贺毒素,并可存在健康家畜的粪便中,可污染食品、水而传播给人。食品、乳品和果汁的不充分加热以及未干净洗手常导致o157:h7的传染风险。一些水果未洗净而压榨果汁,果汁未高温灭菌,也可导致o157:h7传染的发生。有人发现,未加防腐剂的在冰箱存放的果汁中,o157:h7可存活20天以上,而加入0.1%的*可减少其存活时间至7天之内。o157:h7可导致出血性肠炎和溶血性尿毒症综合征。
据美国2005年的报道,每年大肠埃希氏菌o157:h7感染病例达73000例。52%来源于食品,9%来源于水污染。食品污染中,约一半来源于绞碎的牛肉,并且夏季容易发生。
二、大肠埃希氏菌o157:h7的检测
虽然pcr得到了相当程度的使用,但传统的培养法仍*。2016年颁布的大肠埃希氏菌o157:h7的食品安全标准(gb4789.36—2016)完整的表述了大肠杆菌o157:h7的检验全流程,但其原理未提,下面简要介绍一下。
o157:h7鉴别的一大依据是o157:h7不发酵*,而大多数大肠埃希菌发酵*。因此,传统含乳糖的麦康凯培养基将乳糖替换为*,就形成了smac培养基。mac即为麦康凯培养基英文的前三个字母,s为*英文的个字母。smac培养基的好处是,可将o157:h7与粪便菌群区分开来。o157:h7为无色菌落,而粪便菌群发酵*为粉色菌落。当然,可能有10%~20%的*非发酵菌也不是o157:h7(如赫尔曼埃希菌、o157:h16等),因此可能会有一些假阳性产生,还需后续再鉴别。曾有人测试过,smac培养基的灵敏度为100%, 特异性为85%, 准确率为86%。尽管这一数字并不具有普遍意义,但smac培养基的特异性存在一定的不足是比较肯定的。
o157:h7还有一个特点,是不水解荧光染料mug,因而不产生荧光。而普通大肠埃希菌水解mug,会发出荧光,因而在国标中,在后的检测步骤中采用了mug-lst肉汤进行鉴别。
还有人发现,结合o157:h7的*和赖氨酸脱羧试验阳性,可提高*试验对o157:h7的特异性。
1990年,thompson等人发现,96%的大肠埃希菌分离株的葡萄糖醛酸酶(glucuronidase)阳性,而o157:h7为葡萄糖醛酸酶阴性。okrend等人在smac平板的基础上加入5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-d-葡糖醛酸环己基铵盐(简称bcig)显色剂(针对葡萄糖醛酸酶),发现可减少36%所需要挑取的错误的可疑菌落。于是,这便成为了大肠埃希氏菌o157:h7显色培养基的工作基础。
图:himedia生产的大肠埃希菌o157:h7选择性显色培养基(货号:mv157)
此外,还有免疫学和pcr方法来检测o157:h7的,以及采用增菌肉汤形式来进行鉴别的。如himedia出的大肠杆菌o157:h7增菌鉴别肉汤(货号m1598)。在增菌的同时就进行了鉴别。它还结合亚碲酸盐(货号fd230),使培养基更具有特异性和选择性。它在接种后在35-37°c培养18-24小时,各菌属或菌种的培养反应显示如下:
大肠杆菌——蓝色,可能有轻微沉淀。加入fd230后,其生长受抑。
大肠杆菌o157:h7——深紫色至洋红色,不受fd230影响。
阪崎氏肠杆菌——白色,可能有轻微沉淀。加入fd230后,其生长受抑。
肺炎克雷伯氏菌——蓝绿色,不受fd230影响。
肠炎沙门氏菌——无色,可能有轻微沉淀,不受fd230影响。
福氏志贺氏菌——无色, 加入fd230,其生长受抑。
见下图
图:大肠杆菌o157:h7增菌鉴别肉汤(货号m1598)。1.对照;2.大肠杆菌o157:h7(nctc 12900);3.大肠杆菌(atcc 25922);4.阪崎克罗诺杆菌(atcc 12868);5.肺炎克雷伯菌(atcc 13883)
这样可将各个菌属(种)进行区分。
参考文献:
1.himedia显色培养基手册
2. escherichia coli 0157:h7: epidemiology, pathogenesis, and methods for detection in food.journal of food protection.1992,55(7):555-565
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