裂解液使用注意事项

细胞裂解液主要作用就是将细胞膜溶解破坏,使细胞内容物释放出来,根据后续实验的目的不同,裂解液中会加入蛋白酶抑制剂或dna酶抑制剂,方便目的物的提取。
裂解液使用注意事项:
1. 为取得理想的使用效果,尽量避免过多的反复冻融。建议将其适当分装成合适的量,然后置于-20℃保存。
2. 细胞裂解蛋白提取的所有操作步骤都需在冰上或4℃进行。
3. 建议在临用前数分钟内加入pmsf,使pmsf的最终浓度为1mm。pmsf可以向我公司订购。
4. 在贴壁培养细胞的操作步骤中,去除贴壁细胞的培养液后,如果血清中的蛋白没有干扰,可以不用清洗。
5. 如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。
6. 在培养细胞的裂解中,如果细胞量较多,必需分装成50~100万细胞/离心管,然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分,而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。
7. 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器或研磨设备,缺点是不如使用匀浆器或研磨那样裂解得比较充分。
8. 如果希望获得更好的裂解效果,细菌和酵母可以分别使用溶菌酶和破壁酶消化,然后再使用本裂解液进行裂解。
9. 复融后的试剂请及时使用,避免裂解液中有效成分失效。

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