ChIP实验超声波破碎仪操作指南

chip实验超声波破碎仪操作指南
做chip**步就是去确定超声波破碎仪的参数设定,由于设备品牌不同,各项参数设置都需要自己摸索,十分不便。故此依据经验提出以下几点仅供参数,希望能给您带来帮助。
1.片段长度,如果是只做chip-pcr的话在200-1000范围内都可以,因为这个长度便于扩增,而chip-seq就得在200-500之间,这个范围便于测序。
2.超声能量,需要做几个梯度(如振幅10%-60%,或功率100w-400w),从小到大去测试,太小不能充分打断,太大则过度打断,甚*会过热、起泡。
3.超声时间,你需要做几个梯度(如1min-5min),这个是指超声总时间,不包括间隔。不要超声过久过度产热,会使你的蛋白变性或起泡,因为溶液里有表面活性剂sds。
4.间隔时间,目的是让之前单次超声产生的热量冷却下来,10s-2min不等,一般不比单次超声时间短
5.注意事项:a建议*好体积不要太小,否则探头容易碰壁或离开液面,散热也不够好;b 整个超声过程*好在冰水混合浴中进行,道理如前; c用1.5ml的ep管超声不易起泡。
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