接下来为你讲解ELISA检测流程之夹心法
elisa检测样本包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本,灵敏度*。在收集标本前都必须有一个完整的计划,必须清楚要检测的成份是否足够稳定。我们提倡新鲜标本尽早检测,对收集后当天就进行检测的标本,及时储存在49c备用,如有特殊原因需要周期收集标本，请造模取材后,将标本及时分装后放在20℃或70°c条件下保存。因冰室与室温存在一定温差,蛋白极易降解,直接影响实验质量,所以避免反复冻融。
elisa检测之夹心法：
1、加样：将标准品工作液依次加入到前两列孔中，每个浓度的工作液并列加两孔，每孔100μl。待测样品加入到其他孔，每孔100μl(若样本浓度高于检测范围，需用标准品&样本稀释液稀释后取样)。给酶标板覆膜，37℃孵育90分钟。提示：加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，避免产生气泡。加样时间宜控制在10分钟内。
2、s物素化抗体/抗原：弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中立即加入物素化抗体/抗原工作液100μl，混匀，酶标板加上覆膜，37℃孵育1小时。
3、洗涤：甩尽孔内液体，每孔加洗涤液350μl，浸泡1-2分钟，吸去或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。重复此洗板步骤3次。提示：此处与其他洗板步骤都可用洗板机。每一步洗涤充分是实验的根本。
4、hrp酶结合物：每孔加酶结合物工作液100μl，混匀，加上覆膜，37℃孵育30分钟。
5、洗涤：弃去孔内液体，洗板5次，方法同步骤3。
6、底物：每孔加底物溶液(tmb)90μl，混匀，加上覆膜，37℃避光孵育15分钟左右。提示：根据实际显色情况酌情缩短或延长孵育时间，但不可超过30分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止。
7、终止：每孔加终止液50μl，终止反应。提示：终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。
8、读值：立即用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度(od值)。应提前打开酶标仪预热，设置好检测程序。
9、实验完毕后，将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存至保质期。
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2、s物素化抗体/抗原：弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中立即加入物素化抗体/抗原工作液100μl，混匀，酶标板加上覆膜，37℃孵育1小时。
3、洗涤：甩尽孔内液体，每孔加洗涤液350μl，浸泡1-2分钟，吸去或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。重复此洗板步骤3次。提示：此处与其他洗板步骤都可用洗板机。每一步洗涤充分是实验的根本。
4、hrp酶结合物：每孔加酶结合物工作液100μl，混匀，加上覆膜，37℃孵育30分钟。
5、洗涤：弃去孔内液体，洗板5次，方法同步骤3。
6、底物：每孔加底物溶液(tmb)90μl，混匀，加上覆膜，37℃避光孵育15分钟左右。提示：根据实际显色情况酌情缩短或延长孵育时间，但不可超过30分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止。
7、终止：每孔加终止液50μl，终止反应。提示：终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。
8、读值：立即用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度(od值)。应提前打开酶标仪预热，设置好检测程序。
9、实验完毕后，将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存至保质期。
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