大鼠细胞培养操作步骤
大鼠细胞培养操作步骤：
1、细胞传代：
细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用pbs或生理盐水清洗-2次；
②加入2ml0.25%（t25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液000rpm左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，t25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在000rpm左右条件下离心4min，弃上清,加-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：
待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用pbs或生理盐水清洗-2次，加入ml 0.25%（t25瓶）
②-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；
③将细胞悬液000rpm左右条件下离心4min，弃上清，加ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
关键词：培养箱 显微镜
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②加入2ml0.25%（t25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液000rpm左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，t25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在000rpm左右条件下离心4min，弃上清,加-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：
待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用pbs或生理盐水清洗-2次，加入ml 0.25%（t25瓶）
②-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；
③将细胞悬液000rpm左右条件下离心4min，弃上清，加ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
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