ELISA方法的测定内容阐明
elisa方法测定内容包括酶和抗体活性、结合物中酶含量和igg含量、酶与igg摩尔比值以及结合率。
1、 酶与抗体的活性
常用琼脂扩散或免疫电泳法，使抗原与抗体形成沉淀线，经pbs漂洗1天，再以蒸馏水浸泡1小时，将琼脂凝胶片浸于酶底物溶液中着色，如果出现应有的颜色反应，再用生理盐水浸泡，颜色仍然不褪，表示结合物既有酶的活性，也有抗体活性。良好的结合物在显色后，琼扩滴度应在1:16以上。另一个测定方法是用系列稀释的酶标抗体直接以elisa方法进行方阵滴定，此法不仅可以测定标记效果，还可以确定酶标抗体的使用浓度。
2、结合物的定量测定
一般是对结合物中的酶和igg进行定量测定。常用紫外分光光度计于403nm和280nm进行测定，然后按下列公式计算：
酶量（mg/ml）=od403×0.42
igg量（mg/ml）=（od280－od403×0.4）×0.94×0.62
对于过碘酸钠氧化法制备的标记抗体量，按下列公式计算：
igg量（mg/ml）=（od280－od403×0.34）×0.62
已知酶量和igg量后，即可计算出标记抗体的摩尔（mol）比值。
hrp/igg摩尔比值=hrp（mg/ml）/igg（mg/ml）×4
结合物中酶总量=hrp（mg/ml）×结合物溶液量
结合物产率=结合物中酶总量/标记时加入的酶量×100%
用于elisa的结合物的酶量为400(g/ml时效果一般，为500(g/ml时效果较好，达 1000(g/ml时效果好。mol.比值由于结合物中含的igg并不wan全可靠，所以不能作为主要参数。一般认为mol.比值为0.7时效果一般，1.0时效果较好，1.5-2.0时最好。酶结合率为 7%时效果一般，为9%－10%较好，达30%以上时最好。
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2、结合物的定量测定
一般是对结合物中的酶和igg进行定量测定。常用紫外分光光度计于403nm和280nm进行测定，然后按下列公式计算：
酶量（mg/ml）=od403×0.42
igg量（mg/ml）=（od280－od403×0.4）×0.94×0.62
对于过碘酸钠氧化法制备的标记抗体量，按下列公式计算：
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已知酶量和igg量后，即可计算出标记抗体的摩尔（mol）比值。
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用于elisa的结合物的酶量为400(g/ml时效果一般，为500(g/ml时效果较好，达 1000(g/ml时效果好。mol.比值由于结合物中含的igg并不wan全可靠，所以不能作为主要参数。一般认为mol.比值为0.7时效果一般，1.0时效果较好，1.5-2.0时最好。酶结合率为 7%时效果一般，为9%－10%较好，达30%以上时最好。
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