蔗糖测试盒说明书
一、测定原理:
蔗糖(sucrose)在水解液中经过沸水浴,产物在290nm处有zui大吸收峰,通过测定其
od值,并计算出蔗糖的含量。
二、试剂的组成和配制(50t/48样):
试剂一:水解液100ml×1瓶,4℃保存。
试剂二:蔗糖标准粉剂×1支,4℃保存。
100μmol/ml标准贮备液配制:临用前取1支粉剂加双蒸水定容到1ml,配成100μmol/ml
标准贮备液,4℃保存。
10μmol/ml标准应用液配制:取一定量100μmol/ml标准贮备液,按照1:9比例加入双蒸
水(即10倍体积的稀释),混匀后待测。
三、操作步骤:
1、样本前处理:
准确称取组织重量,按重量(g):体积(ml)=1:9的比例,加入9倍体积的磷酸盐缓冲液(0.1mol/lph 7.4)或生理盐水,制成10%的组织匀浆,3500转/分,离心15分钟,取上清待测。
2、操作表:
空白管
标准管
测定管
双蒸水(ml)
0.03
10μmol/ml蔗糖标准液(ml)
0.03
待测样本(ml)
0.03
水解液(ml)
2.0
2.0
2.0
充分混匀,100℃水浴8分钟,流水冷却,290nm处,1cm光径石英比色皿,双蒸水调零,测各管od值。
四、计算公式:
五、计算举例:
称取大豆叶片,按1:9的比例加入磷酸盐缓冲液,机械匀浆,3500转/分,离心15分钟,取上清检测,测得的空白管od值为0.000;标准管od值为0.240;测定管od 值为0.485;10%大豆叶片匀浆的蛋白浓度是1.39mgprot/ml:
六、相关技术参数:
计数参数
指标
1
检出限
0.2μmol/ml
2
线性范围
0.2~50μmol/ml
3
试剂盒批内cv
2.1%
4
试剂盒批间cv
2.6%
5
呈色稳定性
1h
6
回收率
99.4%
七、标准曲线制作:
取100μmol/ml标准贮备液用双蒸水稀释成不同浓度,按照操作表进行标准曲线制作:
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