鲍曼不动杆菌基因组DNA简述
鲍曼不动杆菌基因组dna基本信息
培养基
蛋白胨：10.0，牛肉粉：3.0，氯化钠：5.0，琼脂：15.0，ph值：7.3±0.1(25℃)
传代方法
使用前请先在缓冲液gd和漂洗液pw中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签； 1.取细菌培养液1-5ml，10,000rpm(11,500×g)离心1min，尽量吸净上清； 2.向菌体沉淀中加入200μl缓冲液ga，振荡至菌体彻di悬浮。注意：对于较难破壁的革兰氏阳性菌，可略过第2步骤，加入溶菌酶溶液进行破壁处理，具体方法为：加入110μl缓冲液（20mm tris,ph8.0；2mm na2-edta；1.2%triton），和70μl溶菌酶溶液（50mg/ml，客户自备，目录号：rt401），37℃处理30min以上。如果需要去除rna，可加入4μl rnase a（100mg/ml）溶液（客户自备，目录号：rt405-12），振荡15sec，室温放置5min； 3.向管中加入20μl proteinase k溶液，混匀； 4.加入220μl缓冲液gb，振荡15sec，70℃放置10min，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。注意：加入缓冲液gb时可能会产生白色沉淀，一般70℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻di，可能导致提取dna量少和提取出的dna不纯； 5.加220μl无水乙醇，充分振荡混匀15sec，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠； 6.将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱cb3中（吸附柱放入收集管中），12,000rpm(13,400×g)离心30sec，倒掉废液，将吸附柱cb3放入收集管中； 7.向吸附柱cb3中加入500μl缓冲液gd（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000rpm(13,400×g)离心30sec，倒掉废液，将吸附柱cb3放入收集管中； 8.向吸附柱cb3中加入600μl漂洗液pw（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000rpm(13,400×g)离心30sec，倒掉废液，吸附柱cb3放入收集管中； 9.重复操作步骤8； 10.将吸附柱cb3放回收集管中，12,000rpm(13,400×g)离心2min，倒掉废液。将吸附柱cb3置于室温放置数分钟，以彻di晾干吸附材料中残余的漂洗液。注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、pcr等）实验； 11.将吸附柱cb3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200μl洗脱缓冲液te，室温放置2-5min，12,000rpm(13,400×g)离心2min，将溶液收集到离心管中。注意：洗脱缓冲液体积不应少于50μl，体积过小影响回收效率。洗脱液的ph值对于洗脱效率有很大影响。若用ddh2o做洗脱液应保证其ph值在7.0-8.5范围内，ph值低于7.0会降低洗脱效率；且dna产物应保存在-20℃，以防dna降解。为增加基因组dna的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱cb3中，室温放置2min，12,000rpm(13,400×g)离心2min；
生长条件
37℃；18-24h；好氧；
存储条件
2-8℃
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