类器官培养基操作指南（以肝癌为例）
货号：ws010-100-kit
品牌：winsera
规格：100ml
操作步骤：
1、原代
(1)取材后的肝癌组织须在2 - 8℃含有组织保存液e的取样瓶中，快速转运至洁净实验室进行组织处理和干细胞分离，拍照并登记信息。
(2)准备若干培养皿，加入4℃预冷的肝癌类器官培养缓冲液b备用
(3)取样瓶消毒，将组织放入培养皿中，利用肝癌类器官培养缓冲液b清洗三次后，利用眼科剪或手术刀将肿瘤组织剪切成体积约为1~3 mm3的组织块。
(4)组织用肝癌原代组织消化液c消化，37℃震荡消化10-20 min，（消化过程中随时观察消化情况）。
(5)取少量液体在显微镜下观察，镜下观察到较多的单个细胞或70μ m以下的细胞簇后，加入三倍体积肝癌类器官培养缓冲液b终止消化。
(6)使用100μm孔径的筛网进行过滤，将滤液收集后，于300g富集离心5min后移去上清，添加肝癌类器官培养缓冲液b重新重悬离心。
(7)基质胶计算：第6步后观察收集到的组织体积，添加25倍组织体积的基质胶重悬铺板。
(8)24孔细胞培养板为例，每孔点胶25ul组织基质胶混合物进行铺板（4℃下操作）。
(9)将铺好的培养板放入37℃培养箱中10-15min成胶，添加肝癌类器官培养基a（恢复室温）进行培养。
2、类器官传代培养
(1)移液器吸去培养基，每孔添加1-2ml 4℃类器官缓冲液b放置2min。
(2)移液抢轻柔吹打基质胶，收集在15ml离心管中，4℃静置10min。（每6-8孔为一组）
(3): 3.1类器官数量不足或体积较小时：离心5min弃去上清，添加适量肝癌类器官缓冲液b重悬移入1.5ml离心管，300g离心5min弃去液体进行第4步。3.2类器官数量较多或体积较大时：离心5min弃去上清，添加适量类器官传代消化液d消化2-3min，添加肝癌类器官缓冲液b终止消化，离心5min弃去混合液，添加适量肝癌类器官缓冲液b重悬移入1.5ml离心管，300g离心5min弃去液体进行第4步。
(4)类器官收集后，添加基质胶重悬，每孔25μl基质胶铺在24孔细胞培养板中，放置培养箱中10-15min添加500μl肝癌类器官培养基a。
3、类器官冻存
(1)移液器吸去培养基，每孔添加1-2ml 4℃类器官缓冲液b放置2min。
(2)移液抢轻柔吹打基质胶，收集在15ml离心管中，4℃静置10min。（每6-8孔为一组）
(3)离心5min弃去上清，添加适量肝癌类器官缓冲液b再次重悬，300g离心5min弃去液体。
(4)添加适量类器官冻存液f，轻柔吹打重悬，以24孔细胞培养板为例：密度为2个孔冻存1管，每管体积1.4ml。
(5)做好标记信息，进行程序降温后，移入液氮长期保存，
4、类器官复苏
(1)取10ml肝癌类器官培养缓冲液b于15ml离心管中
(2)从液氮罐中取出冻存的类器官细胞，快速置于37℃水浴锅中融解。
(3)水浴融解过程中，需轻轻摇动冷冻管，以确保冻存液在1-2分钟内w全融解。
(4)将溶解后的类器官细胞快速转移至15ml离心管，使用移液管轻轻吹打6-8次，300g离心5分钟，然后除去上清液并收集类器官细胞沉淀。添加适量肝癌类器官缓冲液b重悬移入1.5ml离心管300g离心5min。
(5)基质胶重悬，每孔25μl基质胶铺在24孔细胞培养板中，放置培养箱中10-15min成胶，添加500μl肝癌类器官培养基a。
运用范围:
for laboratory research use only. not for use in diagnostic procedures
培养图片展示:
送样要求及癌种
样本的质量将极大影响类器官培养的成功率和效率，因此建议客户提供的样本需符合以下几项要求：
样本类型与要求
新鲜胸腹液：50~100 ml，低温无菌保存。
手术样品：体积大于黄豆大小、越大越好，非纤维化激化灶（越大越好，于肿瘤边缘，12点、3点、6点与9点方向，各取一块)，装入公司专门取样保持管，4度保存，标明样本信息，冷藏运输（48小时内）
穿刺样品：长于2 cm，装入样品瓶，4度保存，标明样本信息，冷藏运输。
培养周期
3-4周
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品牌：winsera
规格：100ml
操作步骤：
1、原代
(1)取材后的肝癌组织须在2 - 8℃含有组织保存液e的取样瓶中，快速转运至洁净实验室进行组织处理和干细胞分离，拍照并登记信息。
(2)准备若干培养皿，加入4℃预冷的肝癌类器官培养缓冲液b备用
(3)取样瓶消毒，将组织放入培养皿中，利用肝癌类器官培养缓冲液b清洗三次后，利用眼科剪或手术刀将肿瘤组织剪切成体积约为1~3 mm3的组织块。
(4)组织用肝癌原代组织消化液c消化，37℃震荡消化10-20 min，（消化过程中随时观察消化情况）。
(5)取少量液体在显微镜下观察，镜下观察到较多的单个细胞或70μ m以下的细胞簇后，加入三倍体积肝癌类器官培养缓冲液b终止消化。
(6)使用100μm孔径的筛网进行过滤，将滤液收集后，于300g富集离心5min后移去上清，添加肝癌类器官培养缓冲液b重新重悬离心。
(7)基质胶计算：第6步后观察收集到的组织体积，添加25倍组织体积的基质胶重悬铺板。
(8)24孔细胞培养板为例，每孔点胶25ul组织基质胶混合物进行铺板（4℃下操作）。
(9)将铺好的培养板放入37℃培养箱中10-15min成胶，添加肝癌类器官培养基a（恢复室温）进行培养。
2、类器官传代培养
(1)移液器吸去培养基，每孔添加1-2ml 4℃类器官缓冲液b放置2min。
(2)移液抢轻柔吹打基质胶，收集在15ml离心管中，4℃静置10min。（每6-8孔为一组）
(3): 3.1类器官数量不足或体积较小时：离心5min弃去上清，添加适量肝癌类器官缓冲液b重悬移入1.5ml离心管，300g离心5min弃去液体进行第4步。3.2类器官数量较多或体积较大时：离心5min弃去上清，添加适量类器官传代消化液d消化2-3min，添加肝癌类器官缓冲液b终止消化，离心5min弃去混合液，添加适量肝癌类器官缓冲液b重悬移入1.5ml离心管，300g离心5min弃去液体进行第4步。
(4)类器官收集后，添加基质胶重悬，每孔25μl基质胶铺在24孔细胞培养板中，放置培养箱中10-15min添加500μl肝癌类器官培养基a。
3、类器官冻存
(1)移液器吸去培养基，每孔添加1-2ml 4℃类器官缓冲液b放置2min。
(2)移液抢轻柔吹打基质胶，收集在15ml离心管中，4℃静置10min。（每6-8孔为一组）
(3)离心5min弃去上清，添加适量肝癌类器官缓冲液b再次重悬，300g离心5min弃去液体。
(4)添加适量类器官冻存液f，轻柔吹打重悬，以24孔细胞培养板为例：密度为2个孔冻存1管，每管体积1.4ml。
(5)做好标记信息，进行程序降温后，移入液氮长期保存，
4、类器官复苏
(1)取10ml肝癌类器官培养缓冲液b于15ml离心管中
(2)从液氮罐中取出冻存的类器官细胞，快速置于37℃水浴锅中融解。
(3)水浴融解过程中，需轻轻摇动冷冻管，以确保冻存液在1-2分钟内w全融解。
(4)将溶解后的类器官细胞快速转移至15ml离心管，使用移液管轻轻吹打6-8次，300g离心5分钟，然后除去上清液并收集类器官细胞沉淀。添加适量肝癌类器官缓冲液b重悬移入1.5ml离心管300g离心5min。
(5)基质胶重悬，每孔25μl基质胶铺在24孔细胞培养板中，放置培养箱中10-15min成胶，添加500μl肝癌类器官培养基a。
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新鲜胸腹液：50~100 ml，低温无菌保存。
手术样品：体积大于黄豆大小、越大越好，非纤维化激化灶（越大越好，于肿瘤边缘，12点、3点、6点与9点方向，各取一块)，装入公司专门取样保持管，4度保存，标明样本信息，冷藏运输（48小时内）
穿刺样品：长于2 cm，装入样品瓶，4度保存，标明样本信息，冷藏运输。
培养周期
3-4周
简单介绍XP-3112日本新宇宙便携式可燃气体检测仪
滚动式真空包装机原理
测锡膏粘度计详细厂家资料介绍
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三倍频电源发生器的操作必须要规范
类器官培养基操作指南（以肝癌为例）
HY27862 气体氧化性试验装置
数控机床加工精度异常故障的诊断与处理
美国嘉仕达真空泵的种类和工作原理
二手搪瓷片式冷凝器的工作原理是什么？
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1046359 用于急停、安全门和光栅监控的安全继电器
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