琼脂糖核酸电泳介绍
琼脂糖核酸电泳步骤
1. 用蒸馏水将制胶模具和梳子冲洗干净，放在制胶平板上，封闭模具边缘，架好梳子；
2. 根据欲分离dna片段大小用凝胶缓冲液配制适宜浓度的琼脂糖凝胶：准确称量琼脂糖干粉，加入到配胶用的三角烧瓶内，定量加入电泳缓冲液（一般
20~30 ml）；
3. 放入到微波炉内加热熔化。冷却片刻，加入一滴荧光染料，轻轻旋转以充分
混匀凝胶溶液，倒入电泳槽中，待其凝固；
4. 室温下30~45 分钟后凝胶全凝结， 小心拔出梳子， 将凝胶安放在电泳槽内；
5. 向电泳槽中倒入电泳缓冲液，其量以没过胶面 1mm为宜，如样品孔内有气
泡，应设法除去；
6. 在dna 样品中加入10×体积的载样缓冲液（loading buffer），混匀后，用枪
将样品混合液缓慢加入被浸没的凝胶加样孔内；
7. 接通电源，红色为正极，黑色为负极，切记dna 样品由负极往正极泳动 (靠
近加样孔的一端为负)。一般60 ～100v电压，电泳20 ～40min即可；
8. 根据指示剂泳动的位置，判断是否终止电泳；
9. 电泳完毕， 关上电源，在凝胶成像仪上观察电泳带及其位置，并与核酸分子
量标准marker比较被扩增产物的大小。
琼脂糖凝胶浓度与线形dna 的最佳分辨范围
琼脂糖凝胶浓度
线形dna 的最佳分辨范围（bp）
0.5%
1,000 ～30,000
0.7%
800 ～12,000
1.0%
500 ～10,000
1.2%
400 ～7,000
1.5%
200 ～3,000
2.0%
50 ～2,000
胶回收纯化dna
1. 琼脂糖电泳，将特异电泳带用刀切下放入到ep管中，称琼脂糖带的重量；
2. 按照每100mg 加400µl 的量加入bindingbuffer，放入到ep管振荡器中，45℃~
55℃温育振荡，直到所有的琼脂糖都溶解（大概要5 分钟）；
3. 取出纯化柱，将上述溶解液转移至柱中，室温下放置2分钟， 8,000rpm 离心
1 分钟，弃ep管中的液体，将纯化柱放回ep 管中；
4. 加500µl的washbuffer至柱中， 8,000rpm 离心1分钟。弃管中的溶液；
5. 重复操作4步的操作1次，最后将纯化柱放入ep管中10,000rpm 离心30秒，
除去痕量的washbuffer；
6. 将纯化柱放入一个新的ep管。加30~40µl h2o或者elutionbuffer至纯化柱膜的中央，在37℃或50℃下放置2 分钟， 10,000rpm离心1 分钟洗脱dna，将
ep管中的dna 溶液放在-20℃保存。
7. 注：若想要不电泳而直接纯化dna 溶液，只需要在第2步中按100µl液量加400µl的bindingbuffer,其余的步骤不变。
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4. 室温下30~45 分钟后凝胶全凝结， 小心拔出梳子， 将凝胶安放在电泳槽内；
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9. 电泳完毕， 关上电源，在凝胶成像仪上观察电泳带及其位置，并与核酸分子
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线形dna 的最佳分辨范围（bp）
0.5%
1,000 ～30,000
0.7%
800 ～12,000
1.0%
500 ～10,000
1.2%
400 ～7,000
1.5%
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2.0%
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1 分钟，弃ep管中的液体，将纯化柱放回ep 管中；
4. 加500µl的washbuffer至柱中， 8,000rpm 离心1分钟。弃管中的溶液；
5. 重复操作4步的操作1次，最后将纯化柱放入ep管中10,000rpm 离心30秒，
除去痕量的washbuffer；
6. 将纯化柱放入一个新的ep管。加30~40µl h2o或者elutionbuffer至纯化柱膜的中央，在37℃或50℃下放置2 分钟， 10,000rpm离心1 分钟洗脱dna，将
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