色谱柱的日常维护和延迟液相色谱柱的适用寿命的方式
色谱仪器中色谱柱的选择至关重要，不同检测物质对色谱柱的要求是不同的，故这就要求我们对色谱柱有一定的了解，下面我们就来说说色谱柱的日常维护和延迟液相色谱柱的适用寿命的方式。
色谱柱的安装
1、首先应确认柱和仪器的接头以及管路是否匹配。为减少死体积,进样阀、柱子、检测器之间的连接管路内径尽可能使用内径较小的管线,同时控制进样器、色谱柱和检测器之间连接管线的长度。安装色谱柱之前,确认流路系统中的溶剂是否正常。对分析较复杂的样品建议安装保护柱。
2、为了使色谱柱与仪器系统达*的连接效果,应尽量使用与色谱柱接口相匹配的螺帽和锥形接头,如原来的接头*匹配其他类型的色谱柱,建议在连接新色谱柱前应检查匹配情况,避免造成色谱柱的损坏或因色谱柱不匹配造成的漏液。
3、使用peek材料的通用接头,只需用手拧紧不需要特定扳手,使用压力为5000psi；使用温度不得超过100℃。
色谱柱日常维护
一、流动相的ph应在使用范围内
以硅胶为基质的反相色谱柱的ph范围为2~9,流动相超过其ph范围将会导致硅胶基质流失和键合相碳链断裂,使柱效下降,寿命变短。
二、去除样品和流动相汇总的固体颗粒
样品和流动相中含有固体颗粒物质会堵塞色谱柱筛板,不仅会引起柱压的升高,而且也会引起柱效下降。因此,建议使用超纯水和色谱纯试剂,在分析前对样品进行针筒过滤,流动相过0.45um滤膜。
三、使用保护柱或在线过滤器
保护柱和在线过滤器上都有筛板,其孔径与色谱柱筛板孔径相同,因此可以阻止固体颗粒物质到达色谱柱,有效防止色谱柱筛板的堵塞。由于柱压升高在分析故障中占很大比例,因此除对样品和流动相进行过滤外,建议您在色谱柱进样端加上保护柱或在线过滤器。
四、正确使用缓冲盐
缓冲盐使用不当会使其在流动相（含有机溶剂）中析出,堵塞填料基质上的微孔和颗粒间的空隙,使填料板结,柱压上升；同时阻碍了基质上的键合的碳链自由舒展,使用色谱柱的保留能力下降,柱效降低。
建议使用前要过滤,使用后要冲洗。具体方法如下：
1、等度条件：使用缓冲盐前和使用后需要过滤流动相1.0ml/min流速冲洗60min.
2、梯度条件：用含有缓冲盐的流动相跑梯度之前,用与初始流动相组成相同的过滤流动相似1.0ml/min流速冲洗60min；分析完成后,再用该过滤流动1.0ml/min冲洗色谱柱120min。含缓冲盐流动相的梯度设定应尽量平缓,以避免梯度过程中缓冲盐析出。
五、柱清洗方法：
1、使用过缓冲盐：分析完成后,先后用上述方法除去缓冲盐,然后再用纯甲醇或乙腈反向冲洗色谱柱60min。
2、未使用缓冲盐：每天分析完成后,用纯甲醇或纯乙腈反向冲洗色谱柱60min。
在选择色谱柱之前,先多了解自己的样品和杂质,他们的类型结构、极性、酸碱性、分子量大小等等,
1.样品是极性的且弱酸性的；就可以选择c18在100%酸性水溶液条件下检测,即要选择承受100%纯水且对极性化合物保留很好的色谱柱
2.如果样品极性太强,或酸性太强；可以选择cn,nh2,或硅胶柱,hilic（亲水色谱）,也有使用c18+强阴离子对试剂或强阴离子交换色谱柱（缺点是离子对试剂平衡时间长,对流动相ph要求比较精密,否则很难重复实验,另外离子对试剂很难洗下来,基本上用了离子对的色谱柱就不能再用于其它实验）
3.若样品是碱性的；可选择高纯硅胶柱（高纯硅胶缺少金属杂质,且硅胶端基封尾）或一些经过修饰的c18柱（如极性嵌入技术或碱去活技术等）,他们都会减少碱性化合物的拖尾,一般会选择中性或偏碱的条件下做,因为这样可增加碱性样品的保留
4.如果碱性化合物的极性太强,或碱性太强；可以选择宽ph的c18色谱柱在高ph值检测（优点是方法开发简单,缺点是目前实现这一技术的色谱柱品牌比较少,价格也高）或者选用hilic色谱柱（硅胶柱在反相条件下使用,这也是很经典的检测碱性样品的方法）选择强离子交换柱（缺点是不能用来分析其它样品,对流动相ph要求比较精密,否则很难重复实验）也有使用c18+强阴离子对试剂或强阴离子交换色谱柱
如何延长液相色谱柱的使用寿命
1.使用”保护柱”,能够延长色谱柱的使用寿命。简单的说,”保护柱”即是很短的色谱柱,填装和所使用液相色谱柱相同的填料。正确使用装在液相色谱柱前面的”保护柱”,可以阻拦一些容易损坏液相色谱柱的物质。而达到延长柱子寿命的效果。如果使用”保护柱”不当。会造成反效果。因为在保护柱使用过程中。如污染达到一定程度而没有及时更换,累积的杂物很可能会冲入色谱柱中,反而会造成色谱柱损坏。因此。使用”保护柱”时,zui重要的是要知道什幺时候该换保护柱。该换的时候就必须要立即更换。
2.选择高品质的柱子,并注意使用方法；可以延长柱子的使用寿命。一般认为同一厂牌、同一型号的柱子之间的品质都相同,对品质管理很严格的厂家而言,这说法是成立的。但如果厂家品质管理不够严格,即使是同一批号的新柱子之间的品质也有差异。所以,选用柱子时必须选择管理严格的高品质柱子,我们知道,任何柱子使用过后都会产生变化。尤其如在强酸或强碱条件下使用,柱子更易产生变化。因此,应尽量选用ph适用范围大的柱子。在开发新分析方法时,许多专家建议不要使用旧柱子。因柱子一经使用。柱性会改变；如此一来,使用旧柱子开发出来的新分析方法,很可能在再使用同厂牌的新柱子分析时。发生无法达到预定效果的情况。总的说。开发新分析方法时要使用品质好的新柱子；并且一支柱子使用在一种分析方法上；则柱子寿命可以延长。
3.定期冲洗柱子可以延长柱子使用寿命。我们知道柱子使用一段时间后总会有一些杂质累积在柱内。这些杂质不会随着流动相出来,自然会逐渐影响柱子的品质。这些杂质在后来的分析谱图上出现。而造成出现怪峰、基线不平等现象。简单的解决方法是用较强的流动相冲洗。是在每次分析某一产品完成后冲洗。如果分析时使用缓冲剂时﹐用水来取代缓冲剂。先使用有机和水的混合溶液为流动相冲洗缓冲剂。接着再用100%有机溶剂冲洗。如果不先用有机和水的混合溶液冲洗,而直接用100%有机溶剂冲洗的话,缓冲剂很可能会沉淀出来,而损坏柱子的品质。使用10-20倍柱体积的量来冲洗基本就足够了。
专家建议将100%有机溶剂冲洗的条件加在分析实验程序完毕地zui后,如此一来每天在开机前都会用100%机溶剂冲洗。一般硅胶柱可以反冲洗处理﹐即是在将冲洗前将柱子倒反接后再冲洗。打算使用反冲洗处理前,先参考柱子的保养说明书。所以要真正保护柱子,使柱子的寿命延长,是使用”保护柱”和定期冲洗柱子。
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色谱柱的安装
1、首先应确认柱和仪器的接头以及管路是否匹配。为减少死体积,进样阀、柱子、检测器之间的连接管路内径尽可能使用内径较小的管线,同时控制进样器、色谱柱和检测器之间连接管线的长度。安装色谱柱之前,确认流路系统中的溶剂是否正常。对分析较复杂的样品建议安装保护柱。
2、为了使色谱柱与仪器系统达*的连接效果,应尽量使用与色谱柱接口相匹配的螺帽和锥形接头,如原来的接头*匹配其他类型的色谱柱,建议在连接新色谱柱前应检查匹配情况,避免造成色谱柱的损坏或因色谱柱不匹配造成的漏液。
3、使用peek材料的通用接头,只需用手拧紧不需要特定扳手,使用压力为5000psi；使用温度不得超过100℃。
色谱柱日常维护
一、流动相的ph应在使用范围内
以硅胶为基质的反相色谱柱的ph范围为2~9,流动相超过其ph范围将会导致硅胶基质流失和键合相碳链断裂,使柱效下降,寿命变短。
二、去除样品和流动相汇总的固体颗粒
样品和流动相中含有固体颗粒物质会堵塞色谱柱筛板,不仅会引起柱压的升高,而且也会引起柱效下降。因此,建议使用超纯水和色谱纯试剂,在分析前对样品进行针筒过滤,流动相过0.45um滤膜。
三、使用保护柱或在线过滤器
保护柱和在线过滤器上都有筛板,其孔径与色谱柱筛板孔径相同,因此可以阻止固体颗粒物质到达色谱柱,有效防止色谱柱筛板的堵塞。由于柱压升高在分析故障中占很大比例,因此除对样品和流动相进行过滤外,建议您在色谱柱进样端加上保护柱或在线过滤器。
四、正确使用缓冲盐
缓冲盐使用不当会使其在流动相（含有机溶剂）中析出,堵塞填料基质上的微孔和颗粒间的空隙,使填料板结,柱压上升；同时阻碍了基质上的键合的碳链自由舒展,使用色谱柱的保留能力下降,柱效降低。
建议使用前要过滤,使用后要冲洗。具体方法如下：
1、等度条件：使用缓冲盐前和使用后需要过滤流动相1.0ml/min流速冲洗60min.
2、梯度条件：用含有缓冲盐的流动相跑梯度之前,用与初始流动相组成相同的过滤流动相似1.0ml/min流速冲洗60min；分析完成后,再用该过滤流动1.0ml/min冲洗色谱柱120min。含缓冲盐流动相的梯度设定应尽量平缓,以避免梯度过程中缓冲盐析出。
五、柱清洗方法：
1、使用过缓冲盐：分析完成后,先后用上述方法除去缓冲盐,然后再用纯甲醇或乙腈反向冲洗色谱柱60min。
2、未使用缓冲盐：每天分析完成后,用纯甲醇或纯乙腈反向冲洗色谱柱60min。
在选择色谱柱之前,先多了解自己的样品和杂质,他们的类型结构、极性、酸碱性、分子量大小等等,
1.样品是极性的且弱酸性的；就可以选择c18在100%酸性水溶液条件下检测,即要选择承受100%纯水且对极性化合物保留很好的色谱柱
2.如果样品极性太强,或酸性太强；可以选择cn,nh2,或硅胶柱,hilic（亲水色谱）,也有使用c18+强阴离子对试剂或强阴离子交换色谱柱（缺点是离子对试剂平衡时间长,对流动相ph要求比较精密,否则很难重复实验,另外离子对试剂很难洗下来,基本上用了离子对的色谱柱就不能再用于其它实验）
3.若样品是碱性的；可选择高纯硅胶柱（高纯硅胶缺少金属杂质,且硅胶端基封尾）或一些经过修饰的c18柱（如极性嵌入技术或碱去活技术等）,他们都会减少碱性化合物的拖尾,一般会选择中性或偏碱的条件下做,因为这样可增加碱性样品的保留
4.如果碱性化合物的极性太强,或碱性太强；可以选择宽ph的c18色谱柱在高ph值检测（优点是方法开发简单,缺点是目前实现这一技术的色谱柱品牌比较少,价格也高）或者选用hilic色谱柱（硅胶柱在反相条件下使用,这也是很经典的检测碱性样品的方法）选择强离子交换柱（缺点是不能用来分析其它样品,对流动相ph要求比较精密,否则很难重复实验）也有使用c18+强阴离子对试剂或强阴离子交换色谱柱
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