MirusBio全能型转染试剂：TransIT-X2®应对多种核酸/蛋白及细胞类型
基于需要递转不同种类核酸/蛋白类型研究，在细胞转染环节，研究者们常碰到如下三类问题：
1、细胞对化学试剂较为敏感，转染后，细胞活率下降或死亡；
2、研究常用细胞类型较多，不同类型细胞，转染效率差异较大，导致单个转染试剂或者实验流程，无法满足实验需求；
3、递转多种类型核酸或蛋白，需要挑选对应的转染试剂，并且需要大量实验优化，才可以得到较高的转染效率。
有没有一款化学转染试剂，可以同时应对常规到难转染的细胞类型，有着较低的细胞毒性，并且适用于多种核酸/蛋白类型递转呢？兼具多重功能、高性能的transit-x2®转染试剂，可同时应对常见细胞及难转染细胞类型，避免条件摸索、大量的重复性实验，轻松地得到您理想的实验结果。
●已验证在大多数细胞类型中(如贴壁/悬浮细胞、原代细胞、神经细胞等)，都有着优异的转染效率、低毒性(特别相对于形成脂质体复合物的lipofectamine®系列试剂)、高性能的表现；
●适用于多种研究领域，包括不限于干细胞研究、基因编辑crispr研究、rnai基因干扰/沉默、稳转细胞株构建、低毒性的转染实验、共转染实验等；
●允许高效且稳定的同时递转多种核酸/蛋白类型，包括不限于质粒dna、sirna/mirna和crispr/cas9组分。
图1、mirus产品年鉴
为什么mirus transit-x2®dynamic delivery system有着如此高性能及广泛适应性呢？这归因于mirus强大且高效的专-利递转平台设计，可进行多重、多功能组合的转染试剂组分筛选并优化。成立于1995年的mirus，专注及深耕核酸递转领域多年，从最早具有低毒性的transit®-lt1到gmp级别、可用于aav和lv生产的transit-virusgen®，都是基于该递转平台进行设计及开发。直至文稿发布时，使用mirus产品发表文章已超过1万篇，并且发表文章及mirus数据库涵盖了超过1千2百种细胞类型，更多文章及数据查询，请见访问链接：因平台限制，请联系欣博盛生物获取。
图2、mirus转染试剂原理示意图
不同于传统基于单组分的转染试剂(如阳离子聚合物或阳离子脂质体)，为了进一步提高转染效率，以应对不同细胞类型或特定的应用。mirus将专-利的多聚物(polymer)及脂质(lipids)技术进行多重组合，在不形成脂质体复合物(liposome，通常具有细胞毒性)前提条件下，得到多种类、高性能的转染方案，克服细胞递转过程中的多重阻碍，以实现更高效转染和更低的细胞毒性(图2)。
图3、mirus独-有智能迭代设计，转染试剂优化流程示意图
基于上述mirus强大、高效的专-利递转平台设计，在进行多重、多组合筛选、优化及后续验证。独-有的智能迭代设计流程，优化转染技术中的每个组分。mirus推出一系列经典转染试剂，以应对多种需求：
1、广谱、高性能、低毒性的转染试剂家族: transit-x2®、transit®-lt1、transit®-2020
2、针对特定细胞类型的转染试剂家族：transit®-293、transit®-brca、transit®-cho、transit-helamonster®、transit®-insect、transit®-jurkat、transit®-keratinocyte
3、针对特定应用的转染试剂家族：
★.病毒生产：virusgen®转染试剂及配套试剂盒、transit®-lenti
★.蛋白/抗体生产：transit-pro®、chogro®expression system、chogro®high yield expression system
4、寡核苷酸递转的转染家族：transit®-oligo、transit-siquest®、transit-tko®
5、mrna及长链rna递转：transit®-mrna
mirus transit-x2®转染试剂性能数据 展示图
4、transit-x2®dynamic delivery system在包括原代细胞多种细胞类型中，具有较高转染效率。
mirus transit-x2®dynamic delivery system递转表达egfp质粒dna分别至a549、cho-k1、hep g2、mdck、lncap、pc-12、原代人乳腺上皮细胞(hmec)和正常人真皮成纤维细胞(nhdf)细胞中。实验使用96孔板，transit-x2®试剂加入量为0.2-0.4µl，dna加入量为0.1µg(使用试剂:dna=2:1、3:1或4:1)。转染后48小时，使用guava®easycyte™ 5ht流式细胞仪重复检测三次，评估转染效率。
图5、相较于使用单一组分且形成阳离子脂质体复合物(liposome)的lipofectamine®系列转染试剂，transit-x2®有着更高的转染效率及更低细胞毒性
使用transit-x2®(mirus bio)、lipofectamine®2000 (thermo fisher scientific)或lipofectamine®3000 (thermo fisher scientific)转染荧光素酶编码质粒dna至a549 (a)或mdck (b)细胞中，转染24小时，通过荧光素酶活性评估转染效率，定量受损细胞中释放的ldh评估细胞毒性。与lipofectamine®2000或lipofectamine®3000的细胞相比，在最佳试剂:dna比例下，trans - x2®有着更高的荧光强度及更低的细胞毒性。
实验tips:针对更多特定细胞类型，试剂使用建议，详细请见：因平台限制，请咨询欣博盛生物获取
mirus transit-x2®在rnai干扰实验中性能数据展示
图6、不同rnai干扰途径示意图
基因沉默相关功能研究在分子和细胞生物学中发挥着重要作用，化学转染也在该研究领域扮演者重要角色。常见参与rnai干扰途径的天然rna分子包括：
★.小干扰rna (small interfering rnas, sirna)：由双链rna(dsrna)断裂所产生的短双链rna(20-25bp)；
★.微小rna(micrornas, mirnas)：非编码rna处理后所产生的一类短的、单链rna(20-22nt)。
利用rnai抑制基因表达的另一种方法为短发夹rna(short hairpin rna , shrna)，这些短rna序列可通过病毒或非病毒载体方式进行表达，更多详细信息可查阅mirus applications | rnai gene silencing。
请见访问链接：因平台限制，请咨询欣博盛生物获取
图7、基于sirna核酸递转类型的基因沉默研究，相比lipofectamine®2000，transit-x2®有着更高的基因沉默效率
transit-x2®dynamic delivery system和lipofectamine®2000转染试剂用于转染sirna(靶点为内源性蛋白质- gapdh和aha1)，对照使用正常人类真皮成纤维细胞(nhdf)递转非靶向sirna。trans it-x2®加入量为4µl，lipofectamine®2000加入量为6µl，sirna加入量都为25 nm。使用qrt-pcr相对于18s rrna水平测量gapdh或aha1 mrna进行检测，转染后48小时均一化至非靶向对照组的mrna水平，误差则为三次复孔实验的标准差。
图8、基于mirna (mirna precursor及mirna mimic)基因沉默研究，相比lipofectamine®2000，transit-x2®有着更高的基因沉默效率
transit-x2®dynamic delivery system和lipofectamine®2000转染试剂用于转染pre-mir™ hsa-mir-1 mirna precursor或者mirvana™ mirna mimic, mir-1 (两者都已验证，可降低ptk9 mrna表达水平)。pre-mir™阴性质控用于评估mrna表达水平基线值。trans it-x2®及lipofectamine®2000试剂加入量都为3µl，加入50 nm mirna。使用qrt-pcr相对于18s rrna水平，经过阴性质控的均一化，得到ptk9 mrna表达水平值。
mirus transit-x2®在crispr基因编辑实验中性能数据展示
经过改造及优化的细菌crispr/cas9系统，已被广泛应用到哺乳细胞的基因编辑中。基于crispr基因编辑实验常见两组分：cas9蛋白及引导rna(grna)。当cas9蛋白切割了靶向基因组dna，会触发两种内源性修复机制，即非同源末端连接(nhej)和同源定向修复(hdr)，以应对细胞中产生的dna断裂。基于nhej细胞修复通路，为非精准、且容易出错细胞修复通路，可引入导致基因功能缺失的indel。基于hdr的细胞修复通路，则需要额外的同源dna作为修复模板，从而实现“精准”修复，在目的基因插入特定的基因或长片段序列。
【 根据研究者们不同的实验需求 】
crispr基因编辑可以有多种类型实验设置，这意味需要面对不同核酸类型的转染甚至共转染，举例如下：
1、质粒pdna转染
作为cripsr实验关键两组分：cas9蛋白及grna，可以设计单个质粒dna，共同表达两组分(a)；或者使用两质粒系统，其中一个质粒表达cas9蛋白，另外一个质粒表达grna(b)；当使用cas9切口酶(nickase)，则需要两条grna，这时可能需要三质粒系统的递转实验。
2、质粒dna及rna寡核苷酸共转染
此时，与上述实验设计不同的是，grna以寡核苷酸形式进行递转，这就意味着递转实验需要同时转染质粒dna以及rna寡核苷酸(a和b)。
3、mrna及rna寡核苷酸共转染
为了避免由于质粒dna基因组整合而导致的脱靶效应，可以共转染编码cas9蛋白的mrna及grna (rna寡核苷酸)。
4、cas9/grna rnp复合物递转
随着cas9蛋白及grna商品化趋于成熟，越来越多的研究者们选择直接从第三方购买高保真cas9蛋白，以及有着额外化学修饰且在细胞内更稳定的grna寡核苷酸。除了极大的缩短和简化crispr实验流程外，相对于质粒或者mrna方式合成，直接递转rnp复合物的方式有着更高的特异性及编辑效率。
实验tips:针对上述不同crispr实验设计及递转情形，transit-x2®dynamic delivery system经优化的具体实验说明
下载链接如下：
因平台限制，请咨询欣博盛生物获取
图9、质粒dna和grna寡核苷酸共转染：transit-x2®分别在293t/17、u2os和nhdf细胞中共转cas9质粒dna与grna(rna寡核苷酸)，都有着较高的基因编辑效率(18-48%)
使用transit-x2®dynamic delivery system (2 µl/孔，24孔板, mirus bio)共转染0.5 µg质粒dna(表达cas9蛋白)及50nm 2-part grna (ppib基因)至hek293t/17, u2os及nhdf细胞中，转染后48小时，t7e1验证切割效率。
图10、cas9/grna rnp复合体递转：相较于lipofectamine®系列转染试剂，transit-x2®有着更高的切割效率
2-part grna (ppib基因，idt)及cas9蛋白(pna bio)形成rnp复合体，分别使用transit-x2®dynamic delivery system(1 µl/孔，mirus bio)、lipofectamine®crisprmax™ (1.5 µl/孔，thermofisher)、lipofectamine®rnaimax (1.5 µl/孔, thermofisher)、lipofectamine®3000 (1.5 µl/孔thermofisher)递转至293t/17及u2os细胞中。测试grna两种使用量(6 nm或12 nm)，相同cas9蛋白加入量(6 nm)，转染后48小时，t7e1验证切割效率。
mirus transit-x2®产品优势
☑、新型基于多组分开发的广谱型转染试剂(适用于多种细胞，包括难转细胞)；
☑、可同时转染核酸及蛋白，包括不限于dna，sirna/mirna和crispr/cas9复合物；
☑、不形成脂质体复合物，降低细胞毒性；
☑、满足多种应用：基因过表达、基因沉默、基因编辑、干细胞研究、稳转细胞株构建等。
相关产品信息
产品名称
规格
货号
transit-x2®dynamic
delivery system
1×0.3ml
mir6003
1×0.75ml
mir6004
1×1.5ml
mir6000
5×1.5ml
mir6005
10×1.5ml
mir6006
更多详情请联系mirus全国授权一级代理-欣博盛生物
美国MEGGER绝缘测试仪MIT230
贴标机在外国人眼中到看法
光流体微通道反应器由哪些结构和系统组成？
球磨机设备型号有哪些？
地表水检测技术的发展与应用
MirusBio全能型转染试剂：TransIT-X2®应对多种核酸/蛋白及细胞类型
人工智能AI，用爱的角度看待它
国标升降式止回阀
中药提取工艺研究进展
手动砂相对密度仪说明书
什么是人工砂、标准砂和混合砂？它们和石英砂的区别有哪些？
里其乐真空泵滤芯的工作原理是什么
QP742Y均压放散阀主要性能与结构特点
GS4200-F压力变送器
PIR保冷管托 PIR保冷管托标准
湖北卷烟防爆空调厂家
键盘按键字母激光雕刻，您能预料到它会发生什么？
平面磨床的注意事项
山药皮长斑点小心农药残留
全球首发！华为矿山行业全系列智能安全单兵装备展示：含改装Mate 60
1、细胞对化学试剂较为敏感，转染后，细胞活率下降或死亡；
2、研究常用细胞类型较多，不同类型细胞，转染效率差异较大，导致单个转染试剂或者实验流程，无法满足实验需求；
3、递转多种类型核酸或蛋白，需要挑选对应的转染试剂，并且需要大量实验优化，才可以得到较高的转染效率。
有没有一款化学转染试剂，可以同时应对常规到难转染的细胞类型，有着较低的细胞毒性，并且适用于多种核酸/蛋白类型递转呢？兼具多重功能、高性能的transit-x2®转染试剂，可同时应对常见细胞及难转染细胞类型，避免条件摸索、大量的重复性实验，轻松地得到您理想的实验结果。
●已验证在大多数细胞类型中(如贴壁/悬浮细胞、原代细胞、神经细胞等)，都有着优异的转染效率、低毒性(特别相对于形成脂质体复合物的lipofectamine®系列试剂)、高性能的表现；
●适用于多种研究领域，包括不限于干细胞研究、基因编辑crispr研究、rnai基因干扰/沉默、稳转细胞株构建、低毒性的转染实验、共转染实验等；
●允许高效且稳定的同时递转多种核酸/蛋白类型，包括不限于质粒dna、sirna/mirna和crispr/cas9组分。
图1、mirus产品年鉴
为什么mirus transit-x2®dynamic delivery system有着如此高性能及广泛适应性呢？这归因于mirus强大且高效的专-利递转平台设计，可进行多重、多功能组合的转染试剂组分筛选并优化。成立于1995年的mirus，专注及深耕核酸递转领域多年，从最早具有低毒性的transit®-lt1到gmp级别、可用于aav和lv生产的transit-virusgen®，都是基于该递转平台进行设计及开发。直至文稿发布时，使用mirus产品发表文章已超过1万篇，并且发表文章及mirus数据库涵盖了超过1千2百种细胞类型，更多文章及数据查询，请见访问链接：因平台限制，请联系欣博盛生物获取。
图2、mirus转染试剂原理示意图
不同于传统基于单组分的转染试剂(如阳离子聚合物或阳离子脂质体)，为了进一步提高转染效率，以应对不同细胞类型或特定的应用。mirus将专-利的多聚物(polymer)及脂质(lipids)技术进行多重组合，在不形成脂质体复合物(liposome，通常具有细胞毒性)前提条件下，得到多种类、高性能的转染方案，克服细胞递转过程中的多重阻碍，以实现更高效转染和更低的细胞毒性(图2)。
图3、mirus独-有智能迭代设计，转染试剂优化流程示意图
基于上述mirus强大、高效的专-利递转平台设计，在进行多重、多组合筛选、优化及后续验证。独-有的智能迭代设计流程，优化转染技术中的每个组分。mirus推出一系列经典转染试剂，以应对多种需求：
1、广谱、高性能、低毒性的转染试剂家族: transit-x2®、transit®-lt1、transit®-2020
2、针对特定细胞类型的转染试剂家族：transit®-293、transit®-brca、transit®-cho、transit-helamonster®、transit®-insect、transit®-jurkat、transit®-keratinocyte
3、针对特定应用的转染试剂家族：
★.病毒生产：virusgen®转染试剂及配套试剂盒、transit®-lenti
★.蛋白/抗体生产：transit-pro®、chogro®expression system、chogro®high yield expression system
4、寡核苷酸递转的转染家族：transit®-oligo、transit-siquest®、transit-tko®
5、mrna及长链rna递转：transit®-mrna
mirus transit-x2®转染试剂性能数据 展示图
4、transit-x2®dynamic delivery system在包括原代细胞多种细胞类型中，具有较高转染效率。
mirus transit-x2®dynamic delivery system递转表达egfp质粒dna分别至a549、cho-k1、hep g2、mdck、lncap、pc-12、原代人乳腺上皮细胞(hmec)和正常人真皮成纤维细胞(nhdf)细胞中。实验使用96孔板，transit-x2®试剂加入量为0.2-0.4µl，dna加入量为0.1µg(使用试剂:dna=2:1、3:1或4:1)。转染后48小时，使用guava®easycyte™ 5ht流式细胞仪重复检测三次，评估转染效率。
图5、相较于使用单一组分且形成阳离子脂质体复合物(liposome)的lipofectamine®系列转染试剂，transit-x2®有着更高的转染效率及更低细胞毒性
使用transit-x2®(mirus bio)、lipofectamine®2000 (thermo fisher scientific)或lipofectamine®3000 (thermo fisher scientific)转染荧光素酶编码质粒dna至a549 (a)或mdck (b)细胞中，转染24小时，通过荧光素酶活性评估转染效率，定量受损细胞中释放的ldh评估细胞毒性。与lipofectamine®2000或lipofectamine®3000的细胞相比，在最佳试剂:dna比例下，trans - x2®有着更高的荧光强度及更低的细胞毒性。
实验tips:针对更多特定细胞类型，试剂使用建议，详细请见：因平台限制，请咨询欣博盛生物获取
mirus transit-x2®在rnai干扰实验中性能数据展示
图6、不同rnai干扰途径示意图
基因沉默相关功能研究在分子和细胞生物学中发挥着重要作用，化学转染也在该研究领域扮演者重要角色。常见参与rnai干扰途径的天然rna分子包括：
★.小干扰rna (small interfering rnas, sirna)：由双链rna(dsrna)断裂所产生的短双链rna(20-25bp)；
★.微小rna(micrornas, mirnas)：非编码rna处理后所产生的一类短的、单链rna(20-22nt)。
利用rnai抑制基因表达的另一种方法为短发夹rna(short hairpin rna , shrna)，这些短rna序列可通过病毒或非病毒载体方式进行表达，更多详细信息可查阅mirus applications | rnai gene silencing。
请见访问链接：因平台限制，请咨询欣博盛生物获取
图7、基于sirna核酸递转类型的基因沉默研究，相比lipofectamine®2000，transit-x2®有着更高的基因沉默效率
transit-x2®dynamic delivery system和lipofectamine®2000转染试剂用于转染sirna(靶点为内源性蛋白质- gapdh和aha1)，对照使用正常人类真皮成纤维细胞(nhdf)递转非靶向sirna。trans it-x2®加入量为4µl，lipofectamine®2000加入量为6µl，sirna加入量都为25 nm。使用qrt-pcr相对于18s rrna水平测量gapdh或aha1 mrna进行检测，转染后48小时均一化至非靶向对照组的mrna水平，误差则为三次复孔实验的标准差。
图8、基于mirna (mirna precursor及mirna mimic)基因沉默研究，相比lipofectamine®2000，transit-x2®有着更高的基因沉默效率
transit-x2®dynamic delivery system和lipofectamine®2000转染试剂用于转染pre-mir™ hsa-mir-1 mirna precursor或者mirvana™ mirna mimic, mir-1 (两者都已验证，可降低ptk9 mrna表达水平)。pre-mir™阴性质控用于评估mrna表达水平基线值。trans it-x2®及lipofectamine®2000试剂加入量都为3µl，加入50 nm mirna。使用qrt-pcr相对于18s rrna水平，经过阴性质控的均一化，得到ptk9 mrna表达水平值。
mirus transit-x2®在crispr基因编辑实验中性能数据展示
经过改造及优化的细菌crispr/cas9系统，已被广泛应用到哺乳细胞的基因编辑中。基于crispr基因编辑实验常见两组分：cas9蛋白及引导rna(grna)。当cas9蛋白切割了靶向基因组dna，会触发两种内源性修复机制，即非同源末端连接(nhej)和同源定向修复(hdr)，以应对细胞中产生的dna断裂。基于nhej细胞修复通路，为非精准、且容易出错细胞修复通路，可引入导致基因功能缺失的indel。基于hdr的细胞修复通路，则需要额外的同源dna作为修复模板，从而实现“精准”修复，在目的基因插入特定的基因或长片段序列。
【 根据研究者们不同的实验需求 】
crispr基因编辑可以有多种类型实验设置，这意味需要面对不同核酸类型的转染甚至共转染，举例如下：
1、质粒pdna转染
作为cripsr实验关键两组分：cas9蛋白及grna，可以设计单个质粒dna，共同表达两组分(a)；或者使用两质粒系统，其中一个质粒表达cas9蛋白，另外一个质粒表达grna(b)；当使用cas9切口酶(nickase)，则需要两条grna，这时可能需要三质粒系统的递转实验。
2、质粒dna及rna寡核苷酸共转染
此时，与上述实验设计不同的是，grna以寡核苷酸形式进行递转，这就意味着递转实验需要同时转染质粒dna以及rna寡核苷酸(a和b)。
3、mrna及rna寡核苷酸共转染
为了避免由于质粒dna基因组整合而导致的脱靶效应，可以共转染编码cas9蛋白的mrna及grna (rna寡核苷酸)。
4、cas9/grna rnp复合物递转
随着cas9蛋白及grna商品化趋于成熟，越来越多的研究者们选择直接从第三方购买高保真cas9蛋白，以及有着额外化学修饰且在细胞内更稳定的grna寡核苷酸。除了极大的缩短和简化crispr实验流程外，相对于质粒或者mrna方式合成，直接递转rnp复合物的方式有着更高的特异性及编辑效率。
实验tips:针对上述不同crispr实验设计及递转情形，transit-x2®dynamic delivery system经优化的具体实验说明
下载链接如下：
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图9、质粒dna和grna寡核苷酸共转染：transit-x2®分别在293t/17、u2os和nhdf细胞中共转cas9质粒dna与grna(rna寡核苷酸)，都有着较高的基因编辑效率(18-48%)
使用transit-x2®dynamic delivery system (2 µl/孔，24孔板, mirus bio)共转染0.5 µg质粒dna(表达cas9蛋白)及50nm 2-part grna (ppib基因)至hek293t/17, u2os及nhdf细胞中，转染后48小时，t7e1验证切割效率。
图10、cas9/grna rnp复合体递转：相较于lipofectamine®系列转染试剂，transit-x2®有着更高的切割效率
2-part grna (ppib基因，idt)及cas9蛋白(pna bio)形成rnp复合体，分别使用transit-x2®dynamic delivery system(1 µl/孔，mirus bio)、lipofectamine®crisprmax™ (1.5 µl/孔，thermofisher)、lipofectamine®rnaimax (1.5 µl/孔, thermofisher)、lipofectamine®3000 (1.5 µl/孔thermofisher)递转至293t/17及u2os细胞中。测试grna两种使用量(6 nm或12 nm)，相同cas9蛋白加入量(6 nm)，转染后48小时，t7e1验证切割效率。
mirus transit-x2®产品优势
☑、新型基于多组分开发的广谱型转染试剂(适用于多种细胞，包括难转细胞)；
☑、可同时转染核酸及蛋白，包括不限于dna，sirna/mirna和crispr/cas9复合物；
☑、不形成脂质体复合物，降低细胞毒性；
☑、满足多种应用：基因过表达、基因沉默、基因编辑、干细胞研究、稳转细胞株构建等。
相关产品信息
产品名称
规格
货号
transit-x2®dynamic
delivery system
1×0.3ml
mir6003
1×0.75ml
mir6004
1×1.5ml
mir6000
5×1.5ml
mir6005
10×1.5ml
mir6006
更多详情请联系mirus全国授权一级代理-欣博盛生物
美国MEGGER绝缘测试仪MIT230
贴标机在外国人眼中到看法
光流体微通道反应器由哪些结构和系统组成？
球磨机设备型号有哪些？
地表水检测技术的发展与应用
MirusBio全能型转染试剂：TransIT-X2®应对多种核酸/蛋白及细胞类型
人工智能AI，用爱的角度看待它
国标升降式止回阀
中药提取工艺研究进展
手动砂相对密度仪说明书
什么是人工砂、标准砂和混合砂？它们和石英砂的区别有哪些？
里其乐真空泵滤芯的工作原理是什么
QP742Y均压放散阀主要性能与结构特点
GS4200-F压力变送器
PIR保冷管托 PIR保冷管托标准
湖北卷烟防爆空调厂家
键盘按键字母激光雕刻，您能预料到它会发生什么？
平面磨床的注意事项
山药皮长斑点小心农药残留
全球首发！华为矿山行业全系列智能安全单兵装备展示：含改装Mate 60