流式细胞仪检测A172细胞凋亡的实验报告实验报告书
流式细胞仪检测a172细胞凋亡的实验报告实验报告书
一、实验仪器与试剂
表格一：实验仪器
仪器
厂家
型号
细胞培养箱
thermo scientific
hera cell co2
低温高速离心机
64r
beckman
流式细胞仪
bd
facs calibur
表格二：试剂
试剂
厂家
dmem 培养液
hyclone
胎牛血清
gibco
无钙、镁pbs 7.4 (0.1 m)
自配
annexin v-fitc/pi凋亡检测试剂盒
bd
二、实验步骤
细胞培养取对数生*的a172 细胞，按1*105个/ml 以1ml 体积接种于6 孔板内。无抗生素培养液培养过夜,到转染时使细胞达到70％的汇合率。
转染
将12.5ul sirna 溶于387.5ul 无血清的dmem 中,混合均匀。
将12.5ul lipofectamine 2000 溶于387.5ul 无血清的dmem 中，混合均
匀。在室温下孵育5 分钟。
将上述两种混合物混合（总体积800ul）,轻轻混合均匀在室温下孵育
20 分钟形成复合物。
在6 孔板中每孔加入800ul 复合物。十字法混合均匀。
细胞在37℃、5%co2培养箱中培养6h 后弃上清液,并加入10％胎牛血
清的dmem 培养液。
染色消化并离心收集细胞（1000rpm/min）后弃上清，加入无钙、镁pbs 1ml 洗
2 次，离心后弃上清。分别加入100μl binding buffer、5μl annexin v-fitc 和5μl
pi 溶液，室温避光孵育15min。
4. 检测
加入400μl binding buffer 后以标准程序用流式细胞仪检测，汞激发波长
488nm，计数1 万个细胞。
三、实验结果
省略
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转染
将12.5ul sirna 溶于387.5ul 无血清的dmem 中,混合均匀。
将12.5ul lipofectamine 2000 溶于387.5ul 无血清的dmem 中，混合均
匀。在室温下孵育5 分钟。
将上述两种混合物混合（总体积800ul）,轻轻混合均匀在室温下孵育
20 分钟形成复合物。
在6 孔板中每孔加入800ul 复合物。十字法混合均匀。
细胞在37℃、5%co2培养箱中培养6h 后弃上清液,并加入10％胎牛血
清的dmem 培养液。
染色消化并离心收集细胞（1000rpm/min）后弃上清，加入无钙、镁pbs 1ml 洗
2 次，离心后弃上清。分别加入100μl binding buffer、5μl annexin v-fitc 和5μl
pi 溶液，室温避光孵育15min。
4. 检测
加入400μl binding buffer 后以标准程序用流式细胞仪检测，汞激发波长
488nm，计数1 万个细胞。
三、实验结果
省略
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