抗体没做预试，用什么样的稀释度比较好呢？
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不同抗体，即使是同一公司的抗体，其的抗体稀释度也是不一样的，需要你实验摸索。我觉得转膜过夜好像没有必要吧，转膜的目的也就是将蛋白转到膜上就行 啦，何必浪费时间呢。至于具体的转膜时间，还要看你的目的蛋白分子量的大小；转膜的设备，是半干式，还是湿式。一抗当然可以过夜，如果你想所短 western blot时间的话，可以增高一抗的孵育温度，我们实验室一般37度，两小时就足够了；你可以参照抗体说明书。至于一抗和二抗得稀释度，你可以一抗 1：1500；二抗1：20000试试。另外建议你洗膜时，多洗几次，是在封闭；一抗和二抗后至少是5x5min，跑一张好膜不容易，多尽点心吧，这 样不会浪费你的时间，只会节省你的时间！
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