建立目的:规范beckman125型液相色谱仪的使用操作,保证液相测量结果的准确性。
1.适用范围
本标准适用于beckman125型液相色谱仪的使用操作。
2.目的与意义
规范beckman125型液相色谱仪的使用操作,保证液相测量结果的准确性。
3.责任
质量分析人员全面负责本sop的实施。
4.的组成
本系统由systemgold®125溶剂输送泵、systemgold®166检测器(190~360nm)、rheodyne7725i手动进样阀、ht-330柱温箱、beckman色谱工作站、打印机等组成。
5.操作步骤
5.1.准备
5.1.1准备所需的流动相,用合适的0.45μm滤膜过滤,超声脱气20min。
5.1.2根据待检样品的需要更换合适的色谱柱(注意方向)。
5.1.3配制样品和标准溶液,用合适的0.20μm滤膜过滤。
5.2.开机
接通电源,依次开启泵、检测器开关,打开计算机进入win2000操作系统,双击桌面的32karat图标进入主菜单对话框,双击instrument图标进入色谱分析界面(包括directcontrol、det166、instrumentsetup等界面)。
5.3.创建分析方法
可在directcontrol界面直接点击各设备单元的图像进行流动相比例、流速、zui大压力限、zui小压力限、检测波长以及检测器开启与关闭等参数的设定,亦可点击“methed/instrumentsetup”进行相应的设定,然后点击“file/methed/saveas”保存设定的方法。
5.4.更换流动相并排气泡
将管路的吸滤器放入装有流动相的储液瓶中,逆时针转动排液阀90-180°,打开排液阀;设流速为5ml/min,冲洗3min后设流速为0停泵,将排液阀顺时针旋转到底,关闭排液阀。如管路中没有气泡,则排气泡操作可省略;如管路中仍有气泡,则重复以上操作直至气泡排尽。
5.5.平衡系统
用流动相冲洗至基线漂移<0.001au/min,噪声为<0.0005au时,可认为系统已达到平衡状态,可以进样。
5.6.输入样品信息
点击“control/singlerun”,在sanpleid(样品名称)、method(方法)、datapath(保存路径)、datafile(文件名)输入相应的信心,然后点击submit提交。
5.7.进样
在“directcontrol”界面点击autozero键调零;用进样针定量吸取样品溶液,在进样阀处于inject状态下插入进样针;逆时针转动进样阀手柄,在load状态下推针进样,再顺时针转动进样阀手柄使其回至inject状态即完成进样操作。
5.8.报告输出与打印
在主菜单对话框内右击instrument图标,点击“openoffline”进入离线分析界面。
5.8.1系统默认报告格式:点击“file/data/new”打开相应文件后,点击“report/view/area%”。
5.8.2自定义报告格式:点击“file/data/new”打开相应文件后,在该界面中单击鼠标右键,点击“graphicalprogramming/definepeaks”,在色谱图中单击自定义峰的起始和终点位置,点击“file/method/save”进行方法保存;点击“report/analyze”,进行自定义报告的分析;点击“method/customreport”,在弹出的界面中分别点击“insertfield”、“insertgraph/datagraph”和“insertreport/runreport”即可分别插入常规信息、图谱、数据,从而完成自定义报告。
完成报告输出后,点击“report/print/area%”或者“report/print/customreport”即可打印报告。
5.9关机
5.9.1测定完毕后,在directcontrol界面点击检测器图标关闭紫外灯。
5.9.2色谱柱的冲洗
5.9.2.1反相柱(c8、c18):流动相含盐的(可将加酸、加三乙胺等情况并入),以乙腈-水(5:95)(乙腈可用甲醇代替,下同)冲洗30min(可视具体情况增加冲洗时间,下同),然后以乙腈冲洗20min以上;流动相不含盐的,以流动相冲洗10min以上,然后以甲醇冲洗20min以上;流动相添加离子的,以乙腈-水(5:95)冲洗45min以上,然后以乙腈冲洗20min以上。流速一般设为1ml/min。成都雅源科技专业提供国产实验设备,进口实验设备(岛津、安捷伦等)主要产品:、液相色谱仪、、气相色谱柱、液相色谱柱、样品瓶、标准品、净化工作台、旋光仪、熔点仪、色谱纯试剂、、酒色谱、柱温箱、水分测定仪、分析天平、紫外可见分光光度计、离心机、旋转蒸发仪、超声波清洗机、定氮仪、、折光仪、酸度计、电导率仪、农残速测仪、生物安全柜、恒温湿箱、真空干燥箱、药物稳定性试验箱、培养箱、、马弗炉、原子吸收等。
5.9.2.2正相柱:流动相含盐的,以不含盐流动相冲洗30min以上,再以正己烷冲洗20min以上(如流动相极性与正己烷有较大差异,可在流动相冲洗后,以异丙醇低速冲洗进行过渡,注意以异丙醇为流动相流速不得超过0.5ml/min,下同);流动相不含盐的,以流动相冲洗20min以上,再以正己烷冲洗20min以上。
5.9.3停泵,逐级关闭工作站窗口,关闭计算机及仪器各部件电源开关。
5.10填写仪器使用记录
6.注意事项
6.1流动相及样品溶液必须用0.45um滤膜过滤,流动相还要进行脱气处理。
6.2进样量zui少为定量环体积的3至5倍,即20μl的定量环zui少进样60至100μl的样品,这样才能*置换样品定量环内残留的溶液,达到所要求的精密度及重现性。推荐采用100ul的平头进样针配合20ul满环进样。
6.3待泵的压力稳定后,方可开启检测器。
6.4试验结束后,待泵的压力逐步降为0后,方可关闭泵的电源。
6.5仔细阅读色谱柱说明书,保证色谱柱系统的适应性(流动相ph2-8;柱压小于2.5kpsi)。
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来源成都雅源科技
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