在北美,西方饮食主要是高脂肪,糖和盐的摄入;在很多情况下,这些因素会导致肥胖,心血管疾病和糖尿病。重要的是,线粒体通过调节各种糖酵解化合物,包括脂肪酸和丙酮酸,用于随后的atp生成,在生理学中发挥关键的稳态作用;必须指出的是,这些基本代谢过程的失调会导致上述疾病。线粒体相关的磷脂酰基链进行重构,即心磷脂(cl)酰基链的重构,会导致基本的心脏代谢过程的功能退化,但这一过程的精确分子机制仍然难以捉摸。在这个新出版的文章中,东卡罗来纳大学的tonya n. zeczycki博士等人使用了openspr局部表面等离子共振技术,为他们提供了他们发现所需的关键结合数据。并将数据发布在the journal of biological chemistry上,标题为:“docosahexaenoic acid lowers cardiac mitochondrialenzyme activity by replacing linoleic acid in the phospholipidome”,openspr获得的结合数证明了dha水平的升高可能通过减少心脏线粒体酶的活性而导致各种代谢疾病。
【摘要】
磷脂酰基链通过直接结合与一系列的跨膜酶和膜相关酶的调控有关。在结合的时,(la)和心磷脂(cl)在与电子传递链(etc)的某些酶组分进行此类调节活动时发挥作用;主要相互作用物是蛋白质复合体i,iii-v和活动的细胞色素c 。庆幸的是,etc的这些蛋白质-脂质相互作用给予了重要的代谢稳定。然而,在线粒体的磷脂结构中,酰基链重构现象可能导致不幸的功能障碍,并可能导致各种代谢疾病。cl约占线粒体质量的15-20%,被认为是异常酰基链重构现象的主要参与者。
此外,二十二碳六烯酸(dha),是一种omega-3脂肪酸,已经被广泛的研究和推广,作为黄斑变性、神经炎症、神经退化和心血管疾病危险因素的改善因;相比之下,这里的研究人员认为,在高水平下,dha可能有助于减少心脏线粒体活动,从而导致代谢功能紊乱。
在这篇文章中,研究人员构建了类似于线粒体内膜组成的仿生线粒体大单层囊泡(luv)。按特性,选择检测了含(18:2)4cl 和(22:6)4cl结构的luvs与etc跨膜蛋白的complex iv的相互作用,暴露于膳食dha的鼠类的(22:6)4cl 水平升高。还应该注意的是,在进行生物物理研究之前,研究人员观察到暴露于dha后的complex iv活性变低。研究结果表明,由重构的(22:6)4cl构建的luv与complex iv的结合明显不同于与未重构的(18:2)4cl构建的luv的结合。
openspr 动力学检测结构表明,complexiv的cl特异性结合位点不能结合重构的(22:6)4 cl;应注意的是,这些结合位点被认为是高亲和力位点。
openspr在此项研究中的关键作用
利用表面等离子共振(spr)测定了带不同成分的cl的luvs和complex iv的相互作用,将溶液中的complex iv固定在羧基传感器上,并在openspr仪器上进行了蛋白质-脂质实验。通过使用openspr,研究人员能够确定(18:2)4cl和(22:6)4cl的 luv与固定化complex iv之间相互作用的动力学数据(结合和解离速率常数,平衡常数和亲和力)。spr结合曲线显示(18:2)4 cl型 luvs在与complexiv之间存在有效的相互作用,并且平衡解离常数(kd)为1.8μm。显著的是 (22:6)4 cl型luvs和complexiv之间检测不到结合,结果表明complex iv结合位点不能结合重构的cl。还需要注意的是,在引入后,complex iv的酶功能得以恢复。据此,这项研究的结果表明,心脏组织中dha水平的升高可能会导致etc酶功能的丧失,从而导致许多代谢疾病的发展。通过使用openspr,研究人员能够从他们自己的实验室平台获得spr数据,从而加速他们的研究,并更快地发表他们的发现。
为什么spr对发表文章至关重要?openspr如何提供帮助?
spr是一项无标记的检测技术,研究人员可以定量分析两种生物分子之间的结合。 spr技术使我们能够确定相互作用的kon,koff和kd,与仅提供终点测量的其他技术(如下拉测定)相比,更能深入了解分子间的相互作用。 spr不仅对于发表文章是必要的,而且对于许多医学和医学研究领域的发展也是必要的,
如下图所示,近几年,依靠spr数据发表的文章数量呈显著增长。
nicoyaopenspr分子互作在心血管疾病研究中的优势:
•操作简单---1小时即可掌控;
•完整动力学参数检测---ka,kd,kd;
•高效率---上样、出结果,一键式分析,10min出结果,1-2h出完整动力学检测结果;
•高精准---检测不受温度、缓冲液折射率影响;
•无需专用校正通道---可忽略的bulk效应;
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