用液相色谱法等技术检测食品中的黄曲霉毒素

黄曲霉毒素(aft)是一类化学结构类似的化合物,均为二氢呋喃香豆素的衍生物。黄曲霉毒素是主要由黄曲霉寄生曲霉产生的次生代谢产物,在湿热地区食品和饲料中出现黄曲霉毒素的机率zui高。它们存在于土壤、动植物、各种坚果中,特别是容易污染花生、玉米、稻米、大豆、小麦等粮油产品,是霉菌毒素中毒性zui大、对人类健康危害极为突出的一类霉菌毒素。
zui易受黄曲霉毒素污染的有花生、玉米、棉籽、禽蛋、肉、奶及奶制品等产品,其次是小麦、高粱和甘薯,而大豆豆粕污染黄曲霉毒素的程度略轻。在我国,粮食和饲料被黄曲毒素污染的概率很高,给饲料企业以及养殖业主带来了很大的损失,而人们食用含有黄曲霉毒素的食物还会危害到身体健康。
黄曲霉毒素被*为强致肝癌的物质,其中黄曲霉毒素b1(afb1)的致癌性zui强。长期食用含有低水平黄曲霉毒素食物的人肝脏将受到较大损害。zui近,有些第三世界的国家报道了许多会由黄曲霉毒素引起急性中毒的新证据,其综合病症的显著特征为呕吐、腹痛、肺水肿、惊厥、痉挛、昏迷,并且由大脑水肿引起死亡和肝脏、肾形矿脉和心脏的脂肪过多。1988年癌症研究中心(iarc)将黄曲霉毒素b1列为人类的强烈致癌物之一,而许多亚洲和非洲的流行病研究者也证实了日粮黄曲霉毒素和肝细胞癌(lcc)有正效应。另外,人类因为黄曲霉毒素而致癌的几率可能与年龄、性别、营养状况以及肝或者寄生虫感染有关。早在1972年,shank等人在泰国调查市售的食品和家庭的熟食(膳食),计算每人每日平均摄入的黄曲霉毒素量,就发现了黄曲霉毒素的摄入量与肝癌发病率的地区分布相一致。菲律宾的玉米和自制花生酱黄曲霉毒素污染严重,其中一个以玉米作为主食的地区与另外一个经常食用自制花生酱的地区人民肝癌的发病概率比其他地区高约7倍以上。在食用花生酱的居民之中,曾测定出吃花生酱后的人尿液中含有黄曲霉毒素代谢产m1,在7个每天由食用花生酱而摄入黄曲霉毒素b1 11.2~15.0毫克的儿童的尿中,有3个样品测出m1。
目前检测霉菌毒素的方法主要分为两大类:确认方法和快速方法。确认方法主要基于理化仪器设备,如薄层色谱法(tlc)、气相色谱法(gc)、高压液相色谱法(hplc)和各种联用技术,如气质联用(gc-ms)、液质联用(hplc-ms)等;快速方法主要是基于免疫化学基础上的免疫分析方法如免疫亲合柱-荧光检测(iac-fld)、酶联免疫吸附法(ellsa)和胶体金免疫层析方法等。
(1)薄层层析法
薄层层析(thin-layer chromatography,tlc)是在黄曲霉毒素研究方面应用zui广的分离技术。自 1990 年它被列为 aoac(association of official agricultural chemists)标准方法,该方法同时具有定性和定量分析黄曲霉毒素的功能。
(2)液相色谱法
液相色谱(liquid chromatography,lc)与薄层层析在许多方面具有相似性二者互相补充。通常用 tlc 进行前期的条件设定,选择适宜的分离条件后再用 lc 进行黄曲霉毒素的定量测定。
(3)免疫化学分析方法
利用具有高度专一性的单克隆抗体或多克隆抗体设计的黄曲霉毒素的免疫分析方法也是zui常用的黄曲霉毒素检测方法。这类方法通常包括放射免疫分析方法(radioimmunoassay,ria),酶联免疫法(enzyme-linked of immunosorbent assay,elisa)和免疫层析法(immunoaflinity column assay,ica)。它们均可以对黄曲霉毒素进行定量测定。
此前,国家也出台过关于黄曲霉毒素的相关检测标准。国家质检总局在《关于印发小麦粉等 5 类食品生产许可证实施细则的通知》中明确规定,黄曲霉毒素 b1 必须检测。第八期《中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局公报》中发布过关于黄曲霉毒素检测方法的国标:a. gb/t 18979-2003 《食品中黄曲霉毒素的测定——免疫亲和层净化液相色谱法和荧光光度法》;b. gb/t 18980-2003 《乳和乳粉中黄曲霉毒素 m1 的测定——免疫亲和层净化液相色谱法和荧光光度法》。以上两项国标均在2003年8月1日开始实施。
此外,2010 中国药典规定使用液相色谱法测定药材、饮片和制剂的黄曲霉毒素(b1、b2、g1、g2),需要检测酸枣仁、僵蚕、胖大海、陈皮、桃仁品种。2015 新版中国药典新增以下 14 味药材的黄曲霉毒素检测:柏子仁、莲子、使君子、槟榔、麦芽、肉豆蔻、决明子、远志、薏苡仁、大枣、地龙、蜈蚣、全蝎、水蛭, 限度为“黄曲霉毒素 b1 不得过 5μg/kg;黄曲霉毒素 g2、黄曲霉毒素 g1、黄曲霉毒素 b2 总量不得过 10μg/kg。

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