PCR实验工作原理
聚合酶链式反应
一、发展简史
聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,pcr）是一种用于放大扩增特定的dna片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊dna复制，pcr的最大特点，是能将微量的dna大幅增加。因此，无论是化石中的古生物、历史人物的残骸，还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液，只要能分离出一丁点的dna，就能用pcr加以放大，进行比对。这也是微量证据的威力之所在。
1983年美国mullis首先提出设想，1985年由其发明了聚合酶链反应，即简易dna扩增法，意味着pcr技术的真正诞生。
二、实验原理
类似于dna的体内复制。
首先待扩增dna模板加热变性解链，随之将反应混合物冷却至某一温度，这一温度可使引物与它的靶序列发生退火，再将温度升高使退火引物在dna聚合酶作用下得以延伸。这种热变性-复性-延伸的过程就是一个pcr循环。
pcr过程是由变性，退火，延伸3个步骤组成的不断重复的过程。标准的pcr过程分为三步：
1.dna变性（90℃-96℃）：双链dna模板在热作用下，氢键断裂，形成单链dn
2.退火（复性）（40℃-65℃）：系统温度降低，引物与dna模板结合，形成局部双链。
3.3.延伸（68℃-75℃）：在taq酶（在72℃左右最佳的活性）的作用下，以dntp为原料，从引物的5′端→3′ 端延伸，合成与模板互补的dna链。
每一循环经过变性、退火和延伸，dna含量既增加一倍。
三、pcr反应要素：
dna模版：可以是双链、单链、提取染色体的dna、克隆的质粒dna，
引物：一对寡聚dna，分别与模板两侧的3’端序列互补，可使dna序列得到扩增
dna聚合酶（taqdna聚合酶）：催化dna合成，
缓冲液：提供dna合成反应所需的ph,离子强度等环境
4种单核苷酸：dntp,提供dna合成原料
实验材料
pcr扩增仪、pcr反应管、pcr离心管、移液器、凝胶电泳设备、冰盒、离心机
模板、pcr引物、taqdna聚合酶、dntp反应缓冲液、mg2+、ddh2o。
pcr反应体系
以dna为模板的反应体系：
模板：dna102~105拷贝
引物
底物：4种dntp
taqdna聚合酶
缓冲液
体积：
以mrna为模板的反应（逆转录pcr）
模板：rna
引物：oligo(dt)12~18
底物：4种dntp
逆转录酶
缓冲液
其他试剂：rna酶抑制剂，mgcl2.dtt.
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1983年美国mullis首先提出设想，1985年由其发明了聚合酶链反应，即简易dna扩增法，意味着pcr技术的真正诞生。
二、实验原理
类似于dna的体内复制。
首先待扩增dna模板加热变性解链，随之将反应混合物冷却至某一温度，这一温度可使引物与它的靶序列发生退火，再将温度升高使退火引物在dna聚合酶作用下得以延伸。这种热变性-复性-延伸的过程就是一个pcr循环。
pcr过程是由变性，退火，延伸3个步骤组成的不断重复的过程。标准的pcr过程分为三步：
1.dna变性（90℃-96℃）：双链dna模板在热作用下，氢键断裂，形成单链dn
2.退火（复性）（40℃-65℃）：系统温度降低，引物与dna模板结合，形成局部双链。
3.3.延伸（68℃-75℃）：在taq酶（在72℃左右最佳的活性）的作用下，以dntp为原料，从引物的5′端→3′ 端延伸，合成与模板互补的dna链。
每一循环经过变性、退火和延伸，dna含量既增加一倍。
三、pcr反应要素：
dna模版：可以是双链、单链、提取染色体的dna、克隆的质粒dna，
引物：一对寡聚dna，分别与模板两侧的3’端序列互补，可使dna序列得到扩增
dna聚合酶（taqdna聚合酶）：催化dna合成，
缓冲液：提供dna合成反应所需的ph,离子强度等环境
4种单核苷酸：dntp,提供dna合成原料
实验材料
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模板、pcr引物、taqdna聚合酶、dntp反应缓冲液、mg2+、ddh2o。
pcr反应体系
以dna为模板的反应体系：
模板：dna102~105拷贝
引物
底物：4种dntp
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体积：
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模板：rna
引物：oligo(dt)12~18
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