干细胞和神经细胞转染利器——jetOPTIMUS®转染试剂
干细胞被认为是可用于建模和修复细胞功能的qiangda和最灵活的细胞类型。目前干细胞被广泛用于药物筛选、细胞治疗、疾病建模、毒理学和基因组编辑研究，可以说几乎用于任何基础和转化研究领域。重要的是，其中许多技术依赖于将基因和/或蛋白质成功引入干细胞，例如crispr/cas9基因编辑。然而，干细胞，特别是多能干细胞（即能够产生任何体细胞类型的细胞）特别难以转染。转染干细胞时最大的挑战是细胞死亡，这在非病毒和病毒转染递送方法之后都有报道。此外，由于对细胞死亡的易感性和快速自我更新，干细胞的转染效率可能低于其他细胞类型。
为了利用基于化学转染进行基因操作的优势，理想的试剂需要实现高转染效率（在干细胞高于50%的情况下），同时最大限度地减少常见的干细胞细胞活力问题。
在此，本文报道了基于化学转染的转染试剂jetoptimus®在三种难转染的干细胞中的转染效率的表现：间充质干细胞（hmscs）、小鼠胚胎干细胞（mescs）和人类诱导多功能干细胞(hipscs)。jetoptimus®基于阳离子聚合物，在各种原代细胞中达到dna的高转染效率，同时对细胞活率和形态的影响最小。此外，还评估了jetoptimus对几种市售和常用的培养物和底物系统上培养hpscs的转染效率。
结果与讨论
1.jetoptimus®确保原代间充质干细胞在多次传代时具有高转染效率
图1：在用jetoptimus®转染egfp质粒24小时后，通过流式细胞术分析评估转染效率，该质粒在培养四个后续传代的原代人间充质干细胞（hmsc）中。
2.jetoptimus®在不影响小鼠胚胎干细胞生存能力的情况下实现了60%以上的转染效率
图2a：在原代mescs中用jetoptimus®转染egfp质粒24小时后，通过流式细胞术分析评估转染效率。
图2b：在原代mescs中用jetoptimus®转染egfp质粒24小时后，通过流式细胞术评估细胞活力。
3.jetoptimus®在hipsc中提供高达80%的转染效率
图3 a：用jetoptimus®在hipsc中转染egfp质粒24小时后，通过流式细胞术分析评估转染效率。
图3b：用egfp质粒转染24小时的hpscs中的gfp表达和相应的相位图像。
4.评估jetoptimus®搭配几种hipsc培养基和底物的转染效率
表1a：jetoptimus®在用几种商业干细胞培养基培养的hipsc中的转染效率从最高到zuidi。
表1b：jetoptimus®在用几种商业干细胞基质培养的hipsc中的转染效率从最高到
转染方法：
质粒pcmv_egfp_luc（6.4kb）编码具有巨细胞病毒（cmv）启动子的增强型绿色荧光蛋白（egfp）/萤光素酶的融合蛋白，购自clontech（#6169-1）。质粒pef1a_egfp（4.9kb）编码具有延伸因子-1α（ef1a）启动子的egfp，购自ezyvec（#a626.1）。pcmv_egfp_luc用于转染hmsc和mes，pef1a_egfp用于转染hipsc。
转染前72小时，将hmscs接种在24孔板中，每孔12000个细胞，接种在500µl相应的细胞维持培养基中，并在37°c下用5%co2孵育。对于mescs，在转染前24小时，将细胞以每孔20000个细胞的速度接种在500µl mes培养基中的24孔板中，并在37°c下用5%co2孵育。对于hipsc，在转染前24小时，将细胞接种在涂有corning®matrigel®基质的24孔板中，该基质含有2 ml mtesr培养基和10µm rock抑制剂，每孔10万个细胞，并在37°c和5%co2下孵育。
对于hmscs和hipcs，在转染前30分钟，移除培养基并用500µl的mscbm代替™，不添加补充物，或分别用500µl含有10µm rock抑制剂的hipscs培养基，将培养板放回培养箱。
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货号
名称
规格
101000051
jetoptimus
0.1 ml
101000027
jetprime®
0.1 ml
101000036
interferin®
0.1 ml
101000056
jetmessenger®
0.1 ml
101000010
pulsin®
0.4 ml
101000040
in vivo-jetpei®
0.1 ml
101000122
invivo-jetrna®+ transfection reagent
1 ml
关键词：培养箱
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图1：在用jetoptimus®转染egfp质粒24小时后，通过流式细胞术分析评估转染效率，该质粒在培养四个后续传代的原代人间充质干细胞（hmsc）中。
2.jetoptimus®在不影响小鼠胚胎干细胞生存能力的情况下实现了60%以上的转染效率
图2a：在原代mescs中用jetoptimus®转染egfp质粒24小时后，通过流式细胞术分析评估转染效率。
图2b：在原代mescs中用jetoptimus®转染egfp质粒24小时后，通过流式细胞术评估细胞活力。
3.jetoptimus®在hipsc中提供高达80%的转染效率
图3 a：用jetoptimus®在hipsc中转染egfp质粒24小时后，通过流式细胞术分析评估转染效率。
图3b：用egfp质粒转染24小时的hpscs中的gfp表达和相应的相位图像。
4.评估jetoptimus®搭配几种hipsc培养基和底物的转染效率
表1a：jetoptimus®在用几种商业干细胞培养基培养的hipsc中的转染效率从最高到zuidi。
表1b：jetoptimus®在用几种商业干细胞基质培养的hipsc中的转染效率从最高到
转染方法：
质粒pcmv_egfp_luc（6.4kb）编码具有巨细胞病毒（cmv）启动子的增强型绿色荧光蛋白（egfp）/萤光素酶的融合蛋白，购自clontech（#6169-1）。质粒pef1a_egfp（4.9kb）编码具有延伸因子-1α（ef1a）启动子的egfp，购自ezyvec（#a626.1）。pcmv_egfp_luc用于转染hmsc和mes，pef1a_egfp用于转染hipsc。
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对于hmscs和hipcs，在转染前30分钟，移除培养基并用500µl的mscbm代替™，不添加补充物，或分别用500µl含有10µm rock抑制剂的hipscs培养基，将培养板放回培养箱。
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