单宁含量检测试剂盒说明书
规格：100t/96s
产品内容：
提取液：液体100ml×2瓶，4℃保存。试剂一：粉剂×1瓶，常温保存。
微量法
标准品：粉剂×1支，10mg单宁酸，4℃保存。临用前加入1.175ml提取液溶解为5000nmol/ml的标准液。
产品说明：
单宁又称植物多酚，是一类广泛存在于植物体内的多元酚化合物。单宁可作为潜在的生物标记物；与蛋白质结合的能力又称为收敛性或涩性。其收敛性是多种生理活性的基础，如止血、抗肿瘤、抗衰老等生理活性，也是影响产品口感的因素之一。
根据光谱特性，单宁在275nm下有较强的紫外吸收，通过利用活性炭能够特异吸附单宁的性质来检测单宁含量。
自备实验用品及仪器：
紫外分光光度计/酶标仪、离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔uv板和蒸馏水。
测定操作：
1、样本处理：
将样本烘干至恒重，粉碎，过40目筛之后，称取约0.05g，加入1ml提取液，封口膜封口防止液体溅出，于70℃水浴提取30min，期间可摇晃数次。12000rpm，25℃，离心10min，取上清，用提取液定容至1ml，待测。
2、操作步骤：
（1）紫外分光光度计/酶标仪预热30min，波长调至275nm。蒸馏水调零。
（2）将5000nmol/ml标准液用提取液稀释为6.25、3.125、1.5625、0.78625、0.4、0.2nmol/ml标准溶液。
（3）加样表：
试剂名称
测定管
对照管
标准管
空白管
试剂一
大约5-7mg
-
-
大约5-7mg
蒸馏水
-
-
-
0.5ml
标准溶液
-
-
0.5ml
-
样品
0.5ml
0.5ml
-
-
充分混匀震荡5min，13000g 离心20min。取200µl上清液测定275nm下的吸光度，分别记为a测定管、a对照管、a标准管、a空白管，计算∆a测定=a对照管-a测定管，a标准=a标准管-a空白管。
单宁含量计算：
1、标准曲线的绘制：
以标准溶液的浓度为x轴，以a标准为y轴，绘制标准曲线，得到方程y=kx+b，将∆a测定带入方程中得到x（nmol/ml）
2、单宁含量计算：
1.按蛋白浓度计算：
单宁含量（nmol/mg prot）=x×v提取÷(v提取×cpr) =x÷cpr。
2.按样本鲜重计算：
单 宁 含量 （nmol/g 鲜 重 ）=x×v 提取÷w =x÷w。cpr： 样品蛋白浓度，mg/ml（蛋白浓度需重新用pbs提取测定）；w：样品质量，g；v提取：
提取液体积，2ml。
注意事项：
1、 当∆a大于1.5时，建议将样品上清液用提取液稀释更大倍数后测量；∆a过小时，建议减少稀释倍数或增加样品质量来测定。
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产品说明：
单宁又称植物多酚，是一类广泛存在于植物体内的多元酚化合物。单宁可作为潜在的生物标记物；与蛋白质结合的能力又称为收敛性或涩性。其收敛性是多种生理活性的基础，如止血、抗肿瘤、抗衰老等生理活性，也是影响产品口感的因素之一。
根据光谱特性，单宁在275nm下有较强的紫外吸收，通过利用活性炭能够特异吸附单宁的性质来检测单宁含量。
自备实验用品及仪器：
紫外分光光度计/酶标仪、离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔uv板和蒸馏水。
测定操作：
1、样本处理：
将样本烘干至恒重，粉碎，过40目筛之后，称取约0.05g，加入1ml提取液，封口膜封口防止液体溅出，于70℃水浴提取30min，期间可摇晃数次。12000rpm，25℃，离心10min，取上清，用提取液定容至1ml，待测。
2、操作步骤：
（1）紫外分光光度计/酶标仪预热30min，波长调至275nm。蒸馏水调零。
（2）将5000nmol/ml标准液用提取液稀释为6.25、3.125、1.5625、0.78625、0.4、0.2nmol/ml标准溶液。
（3）加样表：
试剂名称
测定管
对照管
标准管
空白管
试剂一
大约5-7mg
-
-
大约5-7mg
蒸馏水
-
-
-
0.5ml
标准溶液
-
-
0.5ml
-
样品
0.5ml
0.5ml
-
-
充分混匀震荡5min，13000g 离心20min。取200µl上清液测定275nm下的吸光度，分别记为a测定管、a对照管、a标准管、a空白管，计算∆a测定=a对照管-a测定管，a标准=a标准管-a空白管。
单宁含量计算：
1、标准曲线的绘制：
以标准溶液的浓度为x轴，以a标准为y轴，绘制标准曲线，得到方程y=kx+b，将∆a测定带入方程中得到x（nmol/ml）
2、单宁含量计算：
1.按蛋白浓度计算：
单宁含量（nmol/mg prot）=x×v提取÷(v提取×cpr) =x÷cpr。
2.按样本鲜重计算：
单 宁 含量 （nmol/g 鲜 重 ）=x×v 提取÷w =x÷w。cpr： 样品蛋白浓度，mg/ml（蛋白浓度需重新用pbs提取测定）；w：样品质量，g；v提取：
提取液体积，2ml。
注意事项：
1、 当∆a大于1.5时，建议将样品上清液用提取液稀释更大倍数后测量；∆a过小时，建议减少稀释倍数或增加样品质量来测定。
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