人参皂苷是人参属药材的活性成分,目前已经分离出多达30余种不同的人参皂苷,他们含有两个主要的苷元:原人参三醇(ppt)或原人参二醇(ppd)。人或动物摄入后,在血浆和尿液中可检测到它们的存在。由于人参皂苷的生物活性可能是多种皂苷在体内协同作用的结果,因此,同时分离和测定多种人参皂苷对于研究人参皂苷的药理和毒理学机理具有重要意义。
检测时可以对雄性大鼠进行人参皂苷喂养实验。将采集的新鲜尿样样品离心,去除固体杂质,上清液经固相萃取后,经过超高液相色谱串联质谱测定。内标法定量,方法的检出限为2~18ng/ml,回收率74.9%~94.5%,皂苷种类不同回收率不同。
使用仪器:超液相色谱仪(配有串联四级杆质谱检测器);液体均匀器;离心机;氮吹仪;固相萃取小柱。
测定方法:购买8只8周的雄性大鼠,进行1~13d人参皂苷喂养实验。每日饲喂量是100mg/kg。在第0d取空白尿样,在第7,10,13d取待测尿样。
将采集的新鲜尿样在室温下以3500r/min迅速离心10min,以除去固体污染物,上清液于—20℃保存。
用1ml甲醇和2ml水平衡固相萃取柱,以后在真空下将700μl尿液上清液和50μl内标液过柱,用水淋洗小柱5次并吹干。用甲醇水溶液洗脱柱上的人参皂苷,洗脱2次,每次0.2ml,合并洗脱液。在4℃、20000×g离心10min,用超液相色谱串联质谱分析。
关键词:液相色谱仪 离心机 氮吹仪
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