通用型pcr检测试剂盒利用离心柱内硅基质膜提取rna,在反转录酶的作用下,以rna为模板,以引物为起点合成与rna模板互补的cdna链。在taqdna聚合酶的作用下,经高温变性、低温退火、中温延伸的循环。特点:
1.使用改良型pcr染料,与荧光pcr兼容,此染料功能类似溴酚蓝,扩增结束后无需添加上样液及电泳指示染料即可直接电泳检测。
2.将mg2+与含taqdna聚合酶的mix分开,更加稳定。
3.mix中有一定比例的非taq酶,扩增长片段的效率和灵敏度更高。
4.方便,用户只需准备模板和引物既可以进行pcr实验。
5.快捷,操作步骤已经限度地简化,能减少污染,降低实验误差。
6.产物可直接用于t载体克隆,不需要额外的加a反应。
7.染料单独提供,方便客户组合。
通用型pcr检测试剂盒使用及效果:
在无内毒素试管中,加入100ul细菌内毒素检查用水、内毒素标准溶液,或待测样品。再加入100ul鲎试剂溶液,混匀,37ºc温育t1分钟。温育结束,加入100ul显色基质溶液,混匀,37ºc温育t2分钟。温育结束,加入500ul偶氮化试剂1溶液,混匀,加入500ul偶氮化试剂2溶液,混匀加入500ul偶氮化试剂3溶液,混匀,静置5分钟,于545nm波长处读取吸光度值。
内毒素标准范围(eu/ml)为0.01-0.1,t1为60分钟,t2为6分钟;内毒素标准范围(eu/ml)为0.1-1,t1为10分钟,t2为6分钟。
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