心脏类器官的培养手册
背景介绍心脏是脊椎动物身体中的肌造器官，是人体循环系统的动力器官，为血液流动提供动力。由于其复杂的结构，心脏是最难在体外建模的器官之一。
类器官是一种在体外3d培养并模拟体内器官的细胞结构，可以更准确地保留体内细胞的生物学特性和功能。近年来，mendjan s研究团队以特定的顺序激活所有参与胚胎心脏发育的6个已知信号通路，诱导干细胞自行组织，构建出个体外自组织心脏类器官模型，为心血管疾病的研究开辟了新的方向与思路。
图1.从人类多能干细胞中建立心脏类器官(pmid: 34019794)[1]
心脏类器官的培养方案
我们根据mendjan s[1]发表的文章，整理了人类多能干细胞(hpsc)生成心脏类器官的培养方案。该模型可自发形成空腔，自主跳动，无需支架支持，在受伤后可以自主动员心脏成纤维细胞迁移修复损伤。
图2.hpsc分化为心脏类器官的过程(pmid: 34019794)[1]
1、中胚层诱导
将hpsc(wtc细胞)接种到超低吸附的96孔板上，用flyab(ins)培养基（cdm培养基含有30 ng/ml fgf2，5 μm ly294002，50 ng/ml activin a，10 ng/ml bmp4，1 μg/ml insulin，4-8μm chir99021，5μmy-27632）培养36 h-40 h；
2、心脏中胚层
更换为bfiiwpra培养基（cdm培养基含有10ng/ml bmp4，8 ng/ml fgf2，10 μg/ml insulin，5μmiwp2，0.5 μm retinoic acid，200 ng/ml vegf-a）培养4天，每日换液；
3、特异性cm分化
更换为bfi培养基（含有10ng/ml bmp4，8 ng/ml fgf2，10 μg/ml insulin，100 ng/ml vegf-a）培养2天，每日换液；
图3.hpsc分化为心脏类器官的过程中各时间点的细胞团尺寸变化及明场图片(pmid: 34019794)[1]
4、类器官培养
更换为cdm培养基（含有100 ng/ml vegf-a）继续培养，每两天换液；
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产品名称
产品编号
规格
简介
y-27632
53006es
1mg/5 mg/10 mg
rock抑制剂
chir99021
53003es
2mg/5 mg/10 mg
gsk-3α/β抑制剂
ly294002
52403es
5 mg/10 mg/50mg
pi3k抑制剂
retinoic acid（维甲酸，维a酸）
53001es
100 mg/500 mg/1 g
诱导细胞分化
iwp2
53013es
5 mg/10 mg/50mg
wnt抑制剂
human activin a
91702es
10μg/100μg/500μg
重组蛋白
human bmp4
92053es
10μg/100μg/500μg
重组蛋白
human vegf-a
91502es
10μg/100μg/500μg
重组蛋白
human fgf2
91330es
10μg/100μg/500μg
重组蛋白
insulin
40112es
25 mg/100 mg/500mg/1 g
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