随着细胞被冷冻至冰点以下,悬液中冰晶和溶质的浓度有所增加。如果冷却过程中,胞内水分可以渗出细胞,则可以减少胞内冰晶。通常1℃/min的降温速度可以促进此过程。但是,水分的丧失会导致细胞收缩,当这种收缩达到一定程度,又会导致细胞活性的剧烈下降。冷冻保护剂,如甘油或者二甲基亚砜(dmso),可以缓解这种效应。细胞冻存的标准程序是在含有冷冻保护剂的培养基中,将细胞缓慢冷冻至–70℃,然后将冻存管转移到液氮中以保持低于–130℃的环境。
有很多方法可以实现1℃/min的降温速度。电脑控制的可编程电子降温系统是较好的方式,可以保持降温速度。但这种设备价格较高,仅当对冻存非常敏感的细胞时才有必要使用。
比较经济的方式是将冻存管放置于冻存盒中,在低于–70℃的冰箱中冻存24小时。已有一些商业化冻存盒产品能够非常接近1℃/min的理想降温速度。或者可以将冻存管放置于壁厚大约15mm的1l容积的聚苯乙烯盒子中,并填充入纸、棉绒或者泡沫起到隔热的作用。
冻存管材质分为两种:玻璃或者塑料。玻璃管更难操作,但更适合珍贵细胞的*保存,而且一旦适当密封,其安全性也更高。
低温冻存盒分为纸质和pp材质,适用于放置0.5毫升、1.5毫升或者2.0毫升微型管和冻存管,纸质冻存盒,覆膜防水,可反复冻融。满足样本储存的需求。
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