DNA甲基转移酶3B(DNMT3B)真核蛋白操作步骤
dna甲基转移酶3b(dnmt3b)真核蛋白操作步骤：
ⅰ 实体组织蛋白的提取
1． 在每1ml 冷lysis buffer加入10 μl磷酸酶抑制剂， 1 μl蛋白酶抑制剂和 5μl 100mm pmsf，混匀。冰上保存数分钟待用。
2． 每100mg固体组织置于培养皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小块，加入0.5～1 ml冷 lysis buffer，玻璃匀浆器上下手动匀浆15次，注意低温操作；
3． 取组织匀浆液转移到1.5ml预冷的离心管，离心10000转/分，4℃离心5 min；
4． 取上清转移至新的预冷的离心管中，即为全蛋白提取物，蛋白定量（bradford法、bca法）；
5． 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
ⅱ 培养细胞蛋白提取
1． 贴壁培养的细胞，吸去培养基后，加入10ml/150mm培养板的冷pbs洗两次，每次振摇数次以尽量去除培养液；
2． 悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞，将细胞及培养液移至离心管中， 1000转/分离心10 min，再用10ml/150mm培养板的冷pbs，1000转/分离心5 min洗两次；
3． 在每 1ml冷 lysis buffer加入10μl磷酸酶抑制剂， 1μl蛋白酶抑制剂和5μl 100mm pmsf，混匀。冰上保存数分钟待用。
4． 细胞洗涤后，转至新的预冷的离心管中，加入上述配制好的冷lysis buffer，加入量如下表所示：
细胞数量
lysis buffer加入量
107个
0.5 ml～1 ml
5×106个
0.2 ml～0.5 ml
5．置于4℃摇床平台上，温和振荡15 min；
6． 14,000rpm，4℃离心15min，取上清为全蛋白提取物, 蛋白定量（bradford法、bca法）；
7． 分装保存于-70℃,避免反复冻融
dna碱性胶上样液（1.5 ml）
dna碱性胶上样液（10 ml)
dna尿素-page上样液（1.5 ml）
dna尿素-page上样液（10 ml）
dna上样液（红），6×（非甘油）（见关联产品）
dna上样液（蓝），6×（非甘油）（见关联产品）
dna上样液，6×（红）
dna上样液，6×（蓝）
mirna尿素-page上样液（1.5 ml）
mirna尿素-page上样液（10 ml）
三合一rna上样液（a型）
三合一rna上样液（b型）
核酸染料
sybr green ⅱ核酸染料
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电泳级sybr green i
电泳级耐热型sybr染料
绿如蓝核酸染料（uv）（0.5 ml）
绿如蓝核酸染料（uv）（1.5 ml）
绿如蓝核酸染料（可见光型）
溴化乙锭干粉
溴化乙锭清除剂（eb清除剂）
溴化乙锭溶液（1.5 ml）
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3． 取组织匀浆液转移到1.5ml预冷的离心管，离心10000转/分，4℃离心5 min；
4． 取上清转移至新的预冷的离心管中，即为全蛋白提取物，蛋白定量（bradford法、bca法）；
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2． 悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞，将细胞及培养液移至离心管中， 1000转/分离心10 min，再用10ml/150mm培养板的冷pbs，1000转/分离心5 min洗两次；
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0.5 ml～1 ml
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6． 14,000rpm，4℃离心15min，取上清为全蛋白提取物, 蛋白定量（bradford法、bca法）；
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