elabscience自主研发的caspase 1活性检测试剂盒采用分光光度法,可用于检测细胞、组织裂解液或其它样本的caspase 1 活性。那么你知道elabscience caspase 1活性检测试剂盒的常见问题有什么吗?该如何解决呢?让我们一起来看看吧!
一、od405 值偏低或无信号
1. 焦亡现象不明显或者细胞处于焦亡晚期,细胞破碎死亡。解决方法:焦亡现象不明显以及诱导过度至细胞死亡均无法有效检测到 caspase 1的活化,可设置梯度诱导浓度和诱导时间选择最佳的诱导方案。
2. 细胞诱导时的密度太大。解决方法:降低诱导时细胞的密度,摸索最佳诱导密度,推荐诱导浓密为5~10×105 /ml。
3. 细胞数目太少,cell lysis buffer太多。解决方法:增加细胞的数量,每100万细胞加入50~100 µl cell lysis buffer。
4. 检测总蛋白量较低。解决方法:使用bradford 法测浓度,提高蛋白检测的总量,可以进行预实验检测,检测总蛋白不低于50ug。
5. 温度较高,cell lysis buffer中的dtt失活,caspase 酶失活。解决方法:cell lysis buffer 和细胞裂解过程在冰上进行,每 10 分钟进行涡旋混匀一次,充分保证酶活。
6. 细胞沉淀的保存条件不佳,导致细胞降解,caspase酶失活。解决方法:收集细胞沉淀后立即放入-20℃(1个月)或者-80℃(2个月)保存备用,规定时间内进行检测。
7. 37℃孵育时间过长。解决方法:适当延长 37℃孵育时间,建议最佳孵育时间为1~2小时内,随着时间延长,control 组的背景数值会逐渐增大,导致结果偏低。
二、od405值偏高
1. 细胞处理试剂或者药物有颜色,且在405nm 波长有吸收峰。解决方法:增加细胞离心洗涤的次数,设置细胞处理试剂的空白对照,最终实验结果减去药物试剂的影响。
2. 检测样本中有较多气泡。解决方法:排除气泡后再检测。
3. 使用回收的96孔板中有杂质附着,导致结果偏高。解决方法:建议使用新的一次性 96 孔板。
更多有关elabscience caspase 1活性检测试剂盒的常见问题及解决方法,请联系elabscience试剂盒代理——北京百奥创新科技有限公司。
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