蛋白免疫印迹的基本原理及操作步骤
基本原理：免疫印迹（western blot） 采用的是聚丙/烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。sds-page 可对蛋白质样品进行分离，转移到固相载体——例如硝酸纤维素薄膜（nc）上。固相载体可以吸附蛋白质，并保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。转移后的 nc 膜就称为一个印迹（blot），用蛋白溶液（如 5%bsa 或脱脂奶粉溶液）处理，封闭 nc 膜上的疏水结合位点。用目标蛋白的抗体（一抗）处理 nc 膜——只有待研究的蛋白质才能与一抗特异结合形成抗原抗体复合物，这样清洗除去未结合的一抗后，只有在目标蛋白的位置上结合着一抗。用一抗处理过的 nc 膜再用标记的二抗处理，二抗是指一抗的抗体，如一抗是从鼠中获得的，则二抗就是抗鼠igg 的抗体。处理后，带有标记的二抗与一抗结合形成抗体复合物可以指示一抗的位置，即是待研究的蛋白质的位置。
操作步骤：
1.组织或细胞裂解：将需要检测的细胞或组织样本进行裂解，以释放蛋白质。常用的裂解缓冲液包括ripa缓冲液和np-40缓冲液等。
2.蛋白质浓度测定：使用蛋白质浓度测定方法（如bca或bradford法）确定样品中的总蛋白质浓度。
3.蛋白质电泳：将样品中的蛋白质根据大小通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（sds-page）分离。在电泳过程中，样品通常会与还原剂（如β-巯基乙醇）和离子变性剂（如sds）混合，以使蛋白质变性并带有负电荷。
4.转膜：将分离的蛋白质从凝胶转移到聚合物膜（通常是聚偏氟乙/烯膜或硝酸纤维素膜）上。这通常通过电泳转印（electroblotting）完成，其中将膜与凝胶层叠放置，并应用电流使蛋白质迁移至膜上。
5.阻断：将膜放入含有蛋白质阻断剂（如牛血清蛋白、脱脂奶粉或鱼胶）的缓冲液中，以阻止非特异性结合。
6.一抗孵育：将膜与目标蛋白质特异性的一抗（抗体）溶液孵育，使一抗与目标蛋白质发生特异性结合。
7.洗涤：用缓冲液反复洗涤膜，以去除非特异性结合的一抗。
8.二抗孵育：将膜与与一抗的宿主物种不同、带有酶标记的二抗孵育。二抗将特异性地与一抗结合。
9.再次洗涤：用缓冲液反复洗涤膜，以去除非特异性结合的二抗。
10.信号检测：添加特定底物（如光敏底物或发光底物），使酶标记的二抗产生可观察的信号。该信号通常是光辐射或发光。
11.成像和分析：使用化学发光设备（如x光片或光学成像系统）记录膜上的信号，并进行定量分析。ps：在每一步中因采用的具体实验方法不同, 可构成多种免疫印迹分析系统。
打包带拉力机夹具选型
立式内拉床的四大重要模块解读
闪蒸干燥机的使用范畴
四川医院废水处理装置报价
室内电话线\HBV 2×0.5
蛋白免疫印迹的基本原理及操作步骤
【电动掌纹门】电动掌纹门定制-电动掌纹门厂家
粉碎机轴承升温主要因素
X、γ个人辐射报警仪还有哪些应用场景？
众多塑料水箱品牌，贵州浙东非同寻常
国标橡塑保温板厂家生产工厂
薄膜蒸发器操作步骤
智能转速表使用维护操作规程
驱动离心泵的电机电流高的原因是什么?
了解下，安检人员通过X光安检机怎样识别违禁品？
详析数控管子车床故障检查三要素
智慧城市一周热点回顾｜2030年中国将实现6G商用、加快智慧港口和智慧航道建设.......
机床防护罩的技术特点
振实密度测定仪的操作规程
实验室家具的结构相关介绍
操作步骤：
1.组织或细胞裂解：将需要检测的细胞或组织样本进行裂解，以释放蛋白质。常用的裂解缓冲液包括ripa缓冲液和np-40缓冲液等。
2.蛋白质浓度测定：使用蛋白质浓度测定方法（如bca或bradford法）确定样品中的总蛋白质浓度。
3.蛋白质电泳：将样品中的蛋白质根据大小通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（sds-page）分离。在电泳过程中，样品通常会与还原剂（如β-巯基乙醇）和离子变性剂（如sds）混合，以使蛋白质变性并带有负电荷。
4.转膜：将分离的蛋白质从凝胶转移到聚合物膜（通常是聚偏氟乙/烯膜或硝酸纤维素膜）上。这通常通过电泳转印（electroblotting）完成，其中将膜与凝胶层叠放置，并应用电流使蛋白质迁移至膜上。
5.阻断：将膜放入含有蛋白质阻断剂（如牛血清蛋白、脱脂奶粉或鱼胶）的缓冲液中，以阻止非特异性结合。
6.一抗孵育：将膜与目标蛋白质特异性的一抗（抗体）溶液孵育，使一抗与目标蛋白质发生特异性结合。
7.洗涤：用缓冲液反复洗涤膜，以去除非特异性结合的一抗。
8.二抗孵育：将膜与与一抗的宿主物种不同、带有酶标记的二抗孵育。二抗将特异性地与一抗结合。
9.再次洗涤：用缓冲液反复洗涤膜，以去除非特异性结合的二抗。
10.信号检测：添加特定底物（如光敏底物或发光底物），使酶标记的二抗产生可观察的信号。该信号通常是光辐射或发光。
11.成像和分析：使用化学发光设备（如x光片或光学成像系统）记录膜上的信号，并进行定量分析。ps：在每一步中因采用的具体实验方法不同, 可构成多种免疫印迹分析系统。
打包带拉力机夹具选型
立式内拉床的四大重要模块解读
闪蒸干燥机的使用范畴
四川医院废水处理装置报价
室内电话线\HBV 2×0.5
蛋白免疫印迹的基本原理及操作步骤
【电动掌纹门】电动掌纹门定制-电动掌纹门厂家
粉碎机轴承升温主要因素
X、γ个人辐射报警仪还有哪些应用场景？
众多塑料水箱品牌，贵州浙东非同寻常
国标橡塑保温板厂家生产工厂
薄膜蒸发器操作步骤
智能转速表使用维护操作规程
驱动离心泵的电机电流高的原因是什么?
了解下，安检人员通过X光安检机怎样识别违禁品？
详析数控管子车床故障检查三要素
智慧城市一周热点回顾｜2030年中国将实现6G商用、加快智慧港口和智慧航道建设.......
机床防护罩的技术特点
振实密度测定仪的操作规程
实验室家具的结构相关介绍