WPMY-1 人正常前列腺基质永生化细胞传代复苏技巧
wpmy-1 人正常前列腺基质永生化细胞
human normal prostate matrix immortalized cells ,wpmy1
货号：yj-h226（str鉴定）
价格： 1500.0
规格： 1*106
细胞介绍
通过一个prstv质料结构，用sv40大t抗原对基质细胞进行永生化。肌成纤维基质细胞株， wpmy-1与rwpe-1细胞一样，来源于同一张成人前列腺组织切片的周围区域的基质细胞。
细胞特性
1）来源：前列腺
2）形态：成肌细胞，贴壁生长
3）含量：>1x10^6
4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5）规格：t25瓶或者1ml冻存管包装
运输和保存
可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式
（1）干冰运输，收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏；
（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
（3）收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。
细胞接收后的处理：
1） 收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
2） 在显微镜下确认细胞生长状态时，最好在低倍镜（4或5x物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10x和20×物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。
3） 观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将t25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。
4） 贴壁细胞：在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象，如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长，可将t25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基的原培养瓶中（或新的培养瓶中）。
5） 悬浮细胞：t25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基）。
6）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议1：2传代 。
细胞用途：仅供科研使用。
细胞培养操作规程，供参考
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备dmem（推荐yj-0001）培养基；优质胎牛血清，5%；双抗，1%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%dmso，现用现配。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1ml细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4ml培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000rpm条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1ml培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的pbs润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%trypsin-0.53mm edta）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的培养基终止消化。
3.轻轻吹打后吸出，移入15ml离心管中，在1000rpm条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1ml培养液后吹匀。
4.移入到事先准备好的含有5ml培养基的t-25培养瓶中或含有14ml培养基的t-75培养瓶中培养。
注：第一次传代推荐传代比例为1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决定。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
下面t25瓶为例；
1．细胞冻存时，弃去培养基后，pbs清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2．1000rpm离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加dmso至最终浓度为10%。加入dmso后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1x10^6个细胞冻存。
3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
注意事项
1.收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。
2.收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。
3.由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。
4.所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
5.客户在细胞培养过程中，有技术问题可以联系咨询技术售后，我们随时给予解答。
从2011年开始我们致力于在生命科学领域、生物医学实验技术及论文润色服务，协助客户各类实验服务及论文润色十余年，是客户您值得信赖的科研合作伙伴!
如果您受时间、试验条件等限制而无法完成您的课题研究，欢迎您与我们联系。
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cck8检测
he染色
pas糖原染色
western blot
免疫组化ihc染色
荧光定量pcr
阿利新蓝染色
流式细胞检测
免疫荧光染色
激光共聚焦
动物模型服务
石蜡/冰冻切片
透射电镜服务
扫描电镜实验
蛋白双向(2-d)
蛋白双向2d-wb
免疫共沉淀
原位杂交（fish）
蛋白质纯化
探针合成
dna甲基化实验
琼脂糖凝胶电泳
药理毒理动物实验
番红o固绿染色
明胶酶谱mmp
酶活性检测
动物造模/模型实验服务
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细胞特性
1）来源：前列腺
2）形态：成肌细胞，贴壁生长
3）含量：>1x10^6
4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5）规格：t25瓶或者1ml冻存管包装
运输和保存
可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式
（1）干冰运输，收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏；
（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
（3）收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。
细胞接收后的处理：
1） 收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
2） 在显微镜下确认细胞生长状态时，最好在低倍镜（4或5x物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10x和20×物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。
3） 观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将t25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。
4） 贴壁细胞：在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象，如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长，可将t25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基的原培养瓶中（或新的培养瓶中）。
5） 悬浮细胞：t25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基）。
6）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议1：2传代 。
细胞用途：仅供科研使用。
细胞培养操作规程，供参考
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备dmem（推荐yj-0001）培养基；优质胎牛血清，5%；双抗，1%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%dmso，现用现配。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1ml细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4ml培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000rpm条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1ml培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的pbs润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%trypsin-0.53mm edta）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的培养基终止消化。
3.轻轻吹打后吸出，移入15ml离心管中，在1000rpm条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1ml培养液后吹匀。
4.移入到事先准备好的含有5ml培养基的t-25培养瓶中或含有14ml培养基的t-75培养瓶中培养。
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3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
下面t25瓶为例；
1．细胞冻存时，弃去培养基后，pbs清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2．1000rpm离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加dmso至最终浓度为10%。加入dmso后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1x10^6个细胞冻存。
3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
注意事项
1.收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。
2.收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。
3.由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。
4.所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
5.客户在细胞培养过程中，有技术问题可以联系咨询技术售后，我们随时给予解答。
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